第一部分SLC39A6与肿瘤基因组不稳定性的相关性研究目的：肿瘤细胞染色体分裂异常是导致肿瘤基因组不稳定的根本原因,这种不稳定性促进了肿瘤的进展和恶化。本文旨在探讨SLC39A6与肿瘤基因组不稳定性的相关性。方法：采用针对SLC39A6的慢病毒siRNA下调其在Hela细胞中的表达,检测紫杉醇处理细胞克隆形成能力,同时采用特异性针对SLC39A6的siRNA下调剪切变异体1和变异体2,检测下调SLC39A6剪切变异体2表达后细胞对有丝分裂毒性药物的敏感性,检测细胞周期毒性药物引起的周期阻滞改变,通过标记有丝分裂特异性蛋白H3P检测下调SLC39A6剪切变异体2表达减少细胞周期毒性药物引起的M期阻滞改变。将细胞同步化在有丝分裂期后检测下调SLC39A6剪切变异体2表达后有丝分裂进程速度。采用X染色体免疫荧光原位杂交检测下调SLC39A6剪切变异体2引起染色体不稳定性变化,采用实时定量PCR和western检测SLC39A6剪切变异体2表达的周期性变化。结果：采用针对SLC39A6的慢病毒siRNA下调其在Hela细胞中的表达,紫杉醇处理细胞克隆形成能力增加,同时采用特异性针对SLC39A6的siRNA下调剪切变异体1和变异体2下调SLC39A6剪切变异体2表达,细胞对有丝分裂毒性药物的敏感性降低,细胞周期毒性药物引起的周期阻滞减少,通过标记有丝分裂特异性蛋白H3P检测下调SLC39A6剪切变异体2表达,细胞周期毒性药物引起的M期阻滞减少。将细胞同步化在有丝分裂期后,下调SLC39A6剪切变异体2表达后有丝分裂进程速度加快。采用X染色体免疫荧光原位杂交检测下调SLC39A6剪切变异体2引起染色体不稳定性变化增加,实时定量PCR和western检测SLC39A6剪切变异体2表达的变化具有周期性。结论：SLC39A6参与细胞有丝分裂检测点的调控并促进肿瘤基因组不稳定性的增加。第二部分建立活体肿瘤细胞有丝分裂观测平台中文摘要目的：肿瘤细胞染色体分裂异常是导致肿瘤基因组不稳定的根本原因,这种不稳定性促进了肿瘤的进展和恶化。本文旨在探讨H2B-RFP融合蛋白能够更好的观测活体肿瘤细胞有丝分裂过程。方法：将携带H2B-RFP融合基因的质粒瞬时转染人宫颈癌细胞系Hela并利用抗性药物筛选得到阳性细胞克隆,利用激光共聚焦显微镜活体培养系统记录稳定筛选Hela细胞的细胞周期。结果：得到稳定表达H2B- RFP的Hela细胞且其与亲本Hela细胞相比对细胞周期的运行没有影响,并且可以展示Hela细胞有丝分裂的进程。结论：H2B-RFP融合蛋白可以非常敏感的显示肿瘤细胞的染色体并跟踪活体状态下肿瘤细胞有丝分裂过程。第三部分乳腺癌相关成纤维细胞分离培养及鉴定目的：分离培养和鉴定乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,并初步探讨两者生物学性状的差异。方法：用胶原酶消化法获得原代乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,通过显微镜观察细胞形态,免疫荧光观测上皮细胞和成纤维细胞标记,MTT及western检测两者之间生物学性状差异。结果：分离得到乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,两者均高表达Vimentin低表达cytokeratin,且两者在形态及生物学性状有一定差异。结论：与配对成纤维细胞相比,乳腺癌相关成纤维细胞高表达α-SMA,且增值能力增强。第四部分乳腺癌相关成纤维细胞通过HGF促进MCF-7体外侵袭目的：研究乳腺癌相关成纤维细胞(CAF)在乳腺癌细胞系MCF-7迁移和侵袭过程中的作用。并初步探讨HGF在此过程中的作用。方法：胶原酶消化法获得原代CAF及与之配对的正常乳腺成纤维细胞(NF)。在共培养基础上,采用Transwell比较CAF和NF对乳腺癌细胞系MCF-7迁移和侵袭能力的影响。ELISA检测两者之间HGF表达差异。Transwell比较RNA干扰技术降低CAF分泌HGF前后MCF-7迁移和侵袭能力的改变。结果：分离得到高纯度CAF和配对的NF。与NF相比,CAF促进MCF-7迁移和侵袭作用更强。ELISA结果显示CAF高表达HGF, RNA干扰技术降低CAF分泌HGF后MCF-7迁移和侵袭能力减弱。结论：CAF可以通过HGF促进乳腺癌细胞系MCF-7迁移和侵袭。