目的:脓毒症(sepsis)是感染病原体与宿主免疫系统、炎症反应、凝血反应之间相互作用,造成机体器官功能损害的复杂临床综合征,是危重患者的最主要死亡原因之一。在脓毒症时,同时启动的炎症反应与凝血级联反应构成其主要病理生理机制,过度的炎症反应和失控的凝血瀑布效应最终可导致器官功能障碍甚至死亡。脓毒症患者中凝血系统功能紊乱非常普遍,包括促凝活性增强、抗凝活性减弱、纤溶系统受抑制等,凝血系统过度激活最终引起凝血因子消耗和出血倾向,而发生弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation,DIC)。毛细血管内微血栓的形成是脓毒症的重要特征之一。近年来国外研究发现他汀类药物作为脓毒症治疗药物能够有效保护血管内皮细胞功能,具有抗炎、抗凝、减轻重要脏器损伤等作用,并降低死亡率,为脓毒症的治疗提供了新的手段。本研究应用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型,观察辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠凝血功能及肝脏C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的影响,通过多个观察时间点认识脓毒症病生理的发生与发展及他汀类药物的保护作用机制,以期用新的干预方式治疗脓毒症,减少并发症,降低病死率。方法:清洁级健康雌性wistar大鼠80只,体重200-250g(河北医科大学实验动物中心提供)。随机分为4组:正常对照组(Ⅰ组,n=8):麻醉后活杀动物;假手术组(Ⅱ组,n=24):麻醉后开腹翻动盲肠后关腹;脓毒症模型组(Ⅲ组,n=24):麻醉后开腹行盲肠结扎穿孔术;辛伐他汀预处理组(Ⅳ组,n=24):盲肠结扎穿孔术前给予辛伐他汀20mg.kg-1.day-1,溶于1ml灭菌注射用水,灌胃连续两周,其余各组给予等量的生理盐水灌胃。各实验组按时间点(6h、24h、48h)处死大鼠留取标本,每个时间点活杀8只大鼠,留取血液及肝组织标本。监测并记录各组大鼠一般表现如:被毛、精神状态、肛温及存活率;应用全自动血液分析仪对各组大鼠全血白细胞及血小板计数进行测定;留取的血清标本进行组织因子(tissue factor,TF)、纤溶酶原激活物抑制物(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)检测;留取肝组织标本应用免疫组化法检测CRP水平。全部数据采用SPSS12.0统计软件进行统计学分析,计量资料数据以均数±标准差( x?±s)表示,组间比较采用单因素方差分析(One way ANOVA),计数资料采用χ2检验(确切概率法),P<0.05认为有统计学意义。结果:1大鼠一般表现正常对照组大鼠活动正常,反应灵敏,被毛顺滑有光泽,呼吸均匀平稳,排便正常,剖腹未见恶臭、血性渗出液及肠管胀气,无死亡;假手术组大鼠术后1h完全醒转,体温逐渐恢复正常,自由饮水,一般状况同正常对照组,无死亡。脓毒症模型组大鼠于术后1.5h完全醒转,精神萎靡,身体蜷缩,竖毛,呼吸频率加快,直肠温度降低,少量活动、饮水,对刺激反应迟钝,腹胀明显,排稀水样便。剖腹后可闻及恶臭,结扎端盲肠发黑,表面有黄色脓液,小肠胀气,腹腔内大量血性渗出液,肝脏表面出现大量瘀点。辛伐他汀预处理组大鼠在各观察时间点存活数量均较未治疗组多,存活大鼠的活动性、反应状况明显优于未治疗组。2存活率正常对照组、假手术组48h内大鼠存活率为100%,脓毒症模型组及辛伐他汀预处理组大鼠6h内存活率为100%,随时间的延长,存活率逐渐下降,辛伐他汀预处理组大鼠在24h、48h内的存活率较脓毒症模型组升高,但统计结果显示辛伐他汀预处理组大鼠存活率与脓毒症模型组比较无显著差异(P﹥0.05)。3白细胞计数脓毒症模型组大鼠6h、24h、48h白细胞计数较假手术组比较均值下降50%,脓毒症模型符合动物SIRS诊断标准。4肛温比较电子体温计监测各组大鼠直肠温度。脓毒症模型组大鼠6h、24h、48h肛温较假手术组比较下降超过1℃,脓毒症模型符合动物SIRS诊断标准。5组织因子(TF)假手术各时间点TF含量与正常对照组比较差异无统计学意义(P均>0.5);CLP后6h、24h、48h血清TF含量均明显高于假手术组(P﹤0.01),6h血清TF含量明显升高,24h达到高峰,48h有所下降;辛伐他汀预处理组6h、24h、48h血清TF含量与脓毒症模型组比较均明显下降(180.45±61.20 vs 312.15±83.54;341.63±53.52 vs 448.18±54.19;203.13±52.64 vs 310.37±39.75, P﹤0.01)。6纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)假手术各时间点PAI-1含量与正常对照组比较无差异(P均>0.5);CLP后6h、24h、48h血清PAI-1含量均明显高于假手术组(P﹤0.01),6h血清PAI-1含量明显升高,24h达到高峰,48h有所下降;辛伐他汀预处理组6h、24h、48h血清PAI-1含量与脓毒症模型组比较均明显下降(2.08±0.31 vs 2.71±0.39;2.06±0.37 vs 3.42±0.58;1.75±0.24 vs 2.32±0.25,P﹤0.01)。7血小板计数(PLT)假手术各时间点血小板计数与正常对照组比较差异无统计学意义(P均>0.5);CLP后6h、24h、48h PLT均低于假手术组(P﹤0.01),6h PLT与假手术组比较明显下降,随着时间的延长,PLT呈逐渐降低趋势;辛伐他汀预处理组6h、24h、48h PLT与脓毒症模型组比较均明显上升(629.33±31.94 vs 524.00±65.74;571.67±22.01 vs 514.33±32.32;546.00±34.04 vs 452.00±32.00,P﹤0.01)。8肝组织C反应蛋白(CRP)水平的表达肝脏CRP表达主要在细胞浆中,以棕黄色着色为阳性细胞,假手术组各时间点与正常组CRP表达无差异(P均>0.5),肝小叶中肝细胞排列整齐,假手术组有少量阳性细胞表达;脓毒症模型组大鼠肝脏CRP阳性细胞表达各时间点较假手术组比较明显增多(P﹤0.01),造模组24h阳性细胞比例数较6h、48h增高,肝小叶中肝细胞排列紊乱;辛伐他汀预处理组大鼠肝脏CRP阳性细胞表达较脓毒症组各时间点减轻(15.00±3.00 vs 27.67±2.52;11.67±3.51 vs 24.00±8.19;18.00±3.00 vs 26.00±5.57,P﹤0.01),肝细胞排列整齐。结论:1应用盲肠结扎穿孔(CLP)方法可制造出脓毒症模型。2脓毒症可引起血清TF、PAI-1水平升高,PLT水平下降。3辛伐他汀预处理可以降低TF、PAI-1水平,减少PLT消耗。4辛伐他汀预处理可以降低肝脏组织C反应蛋白水平的表达,减轻肝脏炎症反应,保护肝脏功能。