论文部分内容阅读
目的：研究H22小鼠肝癌细胞(H22细胞)全细胞抗原致敏树突状细胞(dendritic cell, DC)前后,DC所分泌的白细胞介素-2(IL-2)、白介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)、α-肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的变化情况,以及致敏DC激活肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)对H22细胞的体外杀伤活性,探讨H22细胞全细胞抗原致敏DC的细胞因子水平的变化在其激活TIL特异杀伤H22细胞中的意义,尤其是H22细胞全细胞抗原致敏DC能提高TIL抗肝癌活性的机理。方法：①从小鼠骨髓细胞中分离出DC及其前体,再联用小鼠粒/巨噬细胞集落刺激因子(murine granulocyte marcophage-colony stimulating factor, GM-CSF)和白介素-4(murine interleukin-4, IL-4)进行体外培养,在DC培养过程中加入小鼠肝癌细胞(H22细胞)全细胞性抗原以致敏DC,测定致敏前后DC细胞因子IL-12、工L-2、IFN-Y、TNF-α的分泌。②采用不连续密度梯度分离法从瘤体中分离纯化TIL并在体外培养扩增,并分离培养小鼠脾脏淋巴细胞,分别配伍成八个组别：H22+DC+TIL组、DC+TIL组、H22+TIL组、TIL组；H22+DC+脾淋巴细胞组、DC+脾淋巴细胞组、H22+脾淋巴细胞组、脾淋巴细胞组,以小鼠H22细胞以及小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)为靶细胞,检测各组别对靶细胞的杀伤活性,并进行各组间比较。结果：①DC致敏前上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的浓度水平分别为：19.36±0.98pg/ml、11.19±1.18pg/ml、1.03±0.19pg/ml、2.02±0.32pg/ml；DC致敏后上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度水平分别为80.39±1.33pg/ml、95.27±6.52pg/ml、29.59±3.15pg/ml、75.12±7.07pg/ml；DC致敏前后,上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的变化有显著差异(P<0.01),DC致敏后其分泌IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α四个因子的水平升高。②H22+DC+TIL组中TIL对H22细胞的杀伤活性为(81.69±3.89)%,而H22+DC+TIL组中TIL对B16细胞的杀伤活性为(30.89±2.78)%,两杀伤活性相较,有显著差异(P<0.01),H22+DC+TIL组中TIL对H22细胞的杀伤活性高于TIL对B16细胞的杀伤活性。H22+DC+TIL组中TIL对H22细胞的杀伤活性与DC+TIL组、H22+TIL组、TIL组、H22+DC+脾淋巴细胞组、DC+脾淋巴细胞组、H22+脾淋巴细胞组、脾淋巴细胞组剩余七组中TIL或脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性相较,杀伤活性有显著差异(P<0.01),H22+DC+TIL组中TIL对H22细胞的杀伤活性高于DC+TIL组、H22+TIL组、TIL组、H22+DC+脾淋巴细胞组、DC+脾淋巴细胞组、H22+脾淋巴细胞组、脾淋巴细胞组剩余七组中TIL或脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性。结论：H22细胞全细胞抗原可致敏小鼠DC,并促进其成熟。H22细胞全细胞抗原致敏DC后,DC分泌的IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α四个细胞因子水平均有明显升高。H22细胞全细胞抗原致敏DC激活的TIL对H22细胞具有很强的体外特异性杀伤活性。H22细胞全细胞抗原致敏DC后,DC分泌的IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α四个细胞因子水平升高使TIL活化增强,同时其中的IFN-γ、TNF-α的水平升高所产生的直接杀伤H22细胞的能力增强,可能是H22细胞全细胞抗原致敏DC能提高肿瘤浸润淋巴细胞抗肝癌活性的机理之一。