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目的支架治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病是目前常用的方式,但植入支架引发血管壁损伤,内皮功能障碍,血管平滑肌细胞高度分化,血管平滑肌细胞(Vascular Smooth Muscle Cells)异常的增殖和迁移是导致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)和支架再狭窄(In-stent stenosis,IRS)发生的重要因素;本研究旨在探究miR-378a-5p在调节血管平滑肌细胞功能的作用和分子机制。方法(1)载脂蛋白E缺失型小鼠(Apolipoprotein E,ApoE-/-)给予高脂喂养构建动脉粥样硬化模型组,健康基础饲料喂养的C57BL/6J小鼠构建对照组,获取两组小鼠的心脏血,应用荧光定量聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)测定两组中miR-378a-5p表达;(2)获取临床支架再狭窄患者和健康个体临床血样,应用RT-PCR测定两个组中miR-378a-5p的表达;(3)培养人血管平滑肌细胞,使用瞬时转染技术,lipo2000转染试剂将miR-378a-5p的过表达物及抑制物转染到VSMCs中并检测表达情况;(4)分别应用Edu(5-Ethynyl-2’-deoxyuridi)和CCK-8(Cell Counting Kit-8)细胞增殖检测试剂盒来测定血管平滑肌细胞的增殖情况;(5)应用划痕实验和Transwell细胞迁移实验测定血管平滑肌细胞的迁移情况;(6)蛋白印迹法(Western blot,WB)检测细胞中p21和CDK1蛋白的表达;(7)使用TargetScan软件预测靶基因,并通过生物信息学分析探究潜在基因的生物学功能;(8)进行RNA免疫沉淀实验(RNA Immunoprecipitation,RIP)和免疫荧光实验(Immunofluorescence,IF)分析miRNA与蛋白质的相互作用及miRNA与下游靶CDK1的结合特性,定位和表达。结果(1)荧光定量聚合酶链式反应结果显示,miR-378a-5p在动脉粥样硬化小鼠和人支架再狭窄血样中表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05);(2)经血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF)刺激的VSMC较NC组miR-378a-5p表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)CCK-8实验和EdU实验检测转染miR-378a-5p过表达物24h后,与NC相比,细胞具有更强的增殖能力,差异具有统计学意义(P<0.05);用划痕实验检测对细胞迁移的影响,我们观察到与NC相比miR-378a-5p mimic组显著促进细胞迁移,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)抑制CDK1的表达,显示血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力均增加,蛋白印迹法检测显示转染了siCDK1的VSMC表型转化蛋白smMHC2表达下降;(5)CDK1是miR-378a-5p的功能靶标,在免疫荧光实验显示miR-378a-5p mimic转染的VSMC中CDK1表达减低,而miR-378a-5p inhibitor组结果相反,荧光强度增强,差异具有统计学意义(P<0.05);RIP实验示表达miR-378a-5p的质粒富集CDK1的效率比不表达miR-378a-5p组明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05);(6)MiR-378a-5p作用于CDK1和p21的表达,从而促进VSMC的增殖和迁移。结论MiR-378a-5p参与调控VSMCs增殖和迁移;MiR-378a-5p通过靶向CDK1/p21信号通路调节VSMC增殖和迁移;MiR-378a-5p有预防和治疗动脉粥样硬化和支架再狭窄的的潜能。