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目的:研究生物钟基因Period2(Per2)在U343人胶质瘤细胞过表达时,Per2基因对人胶质瘤细胞生长的抑制作用及对增殖能力的影响。方法:体外培养U343人胶质瘤细胞,分成三组:分别为Per2基因过表达组,空载体组和U343空白对照组分别培养;克隆Per2基因全长,构建pcDNA3.1(+)per2真核表达质粒,测序验证(已完成);用LipofectamineTM2000脂质体,分别将pcDNA3.1(+)per2和pcDNA3.1(+)分别转入U343细胞内构建Per2基因过表达的U343-pcDNA3.1(+)per2细胞和空载体U343-pcDNA3.1(+)细胞。购买SPF级(specific pathogen free)BALB/C Nude遗传背景裸鼠45只,雄性,4-5周龄,按统计学原则随机分为三组,每组15只,分别将①Per2基因过表达U343-pcDNA3.1(+)per2细胞②空载体U343-pcDNA3.1(+)细胞③U343细胞培养至对数期,常规消化细胞,取1×107个细胞(0.2ml),常规消毒皮肤后,用1ml注射器接种于裸鼠背部皮下,建立皮下移植瘤动物模型。实验组裸鼠共饲养21天,观察移植瘤后各组裸鼠肿瘤生长情况和成瘤时间,至直径约为0.2cm×0.2cm时视为成瘤,并记录成瘤天数;三组裸鼠每组每7天处死5只,取肿瘤组织并比较大小。对取出的肿瘤组织脱水后石蜡包埋,HE染色法观察各组肿瘤情况,PCNA免疫组织化学法检测Per2基因过表达组、空载体组和空白对照组肿瘤组织的增殖情况,进行统计学分析。结果:成功将真核质粒pcDNA3.1(+)per2和pcDNA3.1(+)转入U343人胶质瘤细胞,构建瞬时转染的Per2基因过表达U343-pcDNA3.1(+)per2细胞和空载体U343-pcDNA3.1(+)细胞。成功建立Per2基因过表达组,空载体组和U343空白对照组的移植瘤裸鼠模型。Per2基因过表达组成瘤时间为4.7±0.27天;空载体组成瘤时间为3.2±0.27天;U343空白对照组成瘤时间为3.5±0.35天,各组成瘤率均为100%。接种肿瘤细胞后7-14天,肿瘤生长明显活跃、肿瘤体积迅速增大,Per2基因过表达组肿瘤组织较空质粒组和U343空白对照组体积小,且两两比较有统计学意义(P<0.05)。HE染色法显示为肿瘤组织,PCNA免疫组化结果显示:Per2基因过表达组肿瘤组织内阳性表达减少,经两两统计学比较结果显示,Per2基因过表达组与空载体组、U343空白对照组均有明显差异(P<0.05),空质粒组与阴性对照组之间无明显差异(P>0.05)。结论:本实验成功模拟了人胶质瘤细胞在体内的状态,证明了生物钟基因Per2可以在体内抑制U343人胶质瘤细胞增殖。为后续以生物钟基因Per2作为关键点对人胶质瘤靶向治疗提供了理论依据。