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前言大量流行病学研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hpylori)感染与多种胃疾病,如急性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化生、消化性溃疡、粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤及胃癌的发病相关联。1994年世界卫生组织国际癌症研究署(IARC)以1991年报道的三项前瞻性病例-对照研究为基础将Hpylori定义为Ⅰ类致癌物。流行病学调查资料显示,辽宁庄河地区胃癌死亡率波动在45.21/10万～63.29/10万之间,占当地全死因的8.25%,占肿瘤死亡的38.94%,均高于全国平均水平,属于我国北方胃癌高发区。并且庄河H.pylori感染高发。我室前期研究发现,食用盐腌咸猪肉和H.pylori感染是当地胃癌高发的主要饮食因素和环境因素。我室已成功从咸猪肉中培养出H.pylori,即肉源性H.pylori。体外研究证明,与人源性H.pylori相比,肉源性H.pylori可对人胃上皮细胞GES-1造成更严重的损伤。建立合适的H.pylori感染动物模型对于揭示其可能的致病机制十分必要。目前研究表明慢性H.pylori感染的蒙古沙土鼠发生胃炎、胃溃疡、胃癌等病理组织学改变与人类相似。那么,不同来源H.pylori感染蒙古沙土鼠后,在胃粘膜的定植能力如何?它们能否导致胃粘膜的损伤?损伤程度是否存在差异?其机制如何?以上问题均有待研究。本研究应用肉源性H.pylori及其他人源性H.pylori感染蒙古沙土鼠,观察并比较不同来源H.pylori在蒙古沙土鼠胃粘膜的定植能力及对胃粘膜的损伤作用,深入探讨导致损伤差异的机制,为进一步探讨H.pylori的致病性及其机制提供实验依据。方法1、建立不同来源H.pylori感染的蒙古沙土鼠模型经灌胃接种H.pylori感染MGs。分别在感染13周、26周、52周进行解剖。2、不同来源H.pylori定植能力判定(1)不同来源H.pylori定植的定性判定对蒙古沙土鼠胃粘膜进行苏木素-伊红(Hematoxylin and Eosin Staining,HE)染色、Warthin-Starry(W-S)银染色、Grams染色、尿素酶培养基检测、脑心浸液琼脂培养基培养、聚合酶链反应(PCR)等方法鉴定H.pylori感染。PCR扩增结果与灌胃前H.pylori的PCR扩增结果进行对比,确定蒙古沙土鼠感染的H.pylori是否为灌胃用的H.pylori菌株。(2)不同来源H.pylori定植能力定量判定利用胃粘膜匀浆培养H.pylori菌落计数比较不同来源H.pylori在胃粘膜的定植能力。3、观察不同来源H.pylori对胃粘膜损伤作用石蜡切片HE染色病理组织学胃疾病诊断比较不同来源H.pylori对胃粘膜损伤作用。4、探讨不同来源H.pylori对胃粘膜损伤作用的机制(1)免疫组织化学方法检测Interleukin-8(IL-8)、核转录因子(nuclear factorkappaB,NF-kB)蛋白表达。(2)Western Blot检测新鲜胃粘膜IL-8、NF-kB蛋白的表达。(3)RT-PCR检测新鲜胃粘膜IL-8、NF-kB mRNA的表达。结果1、肉源性H.pylori可以在MGs胃粘膜定植,检出率为100%。2、不同来源H.pylori在MGs胃粘膜的定植能力有差异,肉源性H.pylori在MGs胃粘膜定植密度高于人源性H.pylori(P＜0.01)。3、不同来源H.pylori导致MGs胃粘膜的损伤作用有差异,肉源性H.pylori可以导致MGs更严重的胃粘膜损伤(P＜0.05)。4、H.pylori伴有高盐饮食比单纯H.pylori导致MGs更严重的胃粘膜损伤(P＜0.05)。5、NF-kB p65蛋白及mRNA表达在肉源性H.pylori组的表达高于人源性H.pylori组(P＜0.05)。6、IL-8蛋白及mRNA表达在肉源性H.pylori组的表达高于人源性H.pylori组(P＜0.05)。7、NF-kB p65表达与H.pylori定植密度有显著相关性(P＜0.05)。8、IL-8表达与H.pylori定植密度有显著相关性(P＜0.05)。9、IL-8表达与NF-kB p65表达有显著相关性(P＜0.05)。10、NF-kB p65蛋白及mRNA表达在H.pylori伴有高盐饮食组的表达高于单纯H.pylori感染组(P＜0.05)。11、IL-8蛋白及mRNA表达在H.pylori伴有高盐饮食组的表达高于单纯H.pylori感染组(P＜0.05)。结论1、肉源性H.pylori可以在MGs胃粘膜定植并导致其胃粘膜损伤。2、与人源性H.pylori比较,肉源性H.pylori在MGs胃粘膜定植能力更强,并可以导致更严重的胃粘膜损伤。3、与单纯H.pylori感染比较,H.pylori感染伴有高盐饮食可以导致MGs更严重的胃粘膜损伤。4、肉源性H.pylori感染MGs后,可以活化NF-kB p65,从而上调IL-8的表达,导致蒙古沙土鼠更严重的胃粘膜损伤。5、在高盐条件下,H.pylori感染可以活化NF-kB p65,从而上调IL-8的表达,可能是H.pylori感染伴有高盐饮食导致MGs更严重胃粘膜损伤的机制之一。