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在肿瘤细胞和永生化细胞中，端粒酶介导的端粒延长与端粒结合蛋白1（TRF1）对端粒长度的负调控作用之间处于动态平衡，使端粒维持在一特定长度。近来发现一种新的端粒酶系统调控酶—端锚聚合酶1（Tankyrasel，TANK1），在细胞间期TANK1与TRF1结合共同定位于染色体末端，催化TRF1核糖基化而从端粒脱落，以便于端粒酶延伸端粒序列。该酶是调控端粒复制中最为明确的一环，是细胞癌变机制和癌症靶标研究的新热点。国外的研究现状为对TANK1结构及其细胞核内、外定位功能方面的探讨，少数学者报道了TANK1在某些恶性肿瘤中表达水平上调，并与hTERT（人端粒酶逆转录酶）的表达呈明显正相关。国内文献仅限于对该酶相关功能的综述性报道。国内、外罕见TANK1反义核酸作用于恶性肿瘤研究的相关文献报道。本课题旨在探讨TANK1反义寡核苷酸对人肺癌细胞系CALU增殖的影响。 目的：探讨TANK1反义寡核苷酸对人肺癌细胞系CALU增殖的抑制情况，为肺癌基因治疗的靶标研究探索新途径。 方法：设计合成TANK1正义寡核苷酸（TANK1-SODN）、反义寡核苷酸（TANK1-ASODN），待人肺癌细胞株CALU裸鼠蹊部皮下接种成瘤后，将成瘤裸鼠随机分成3组：对照组4只，正义组与反义组各5只。采用瘤体多位点注射的方法观察实体瘤的生长情况及肿瘤组织学、电镜癌细胞超微结构的改变；免疫组织化学SABC（链霉亲和素-生物素-酶复合物）法检测3组肺癌细胞中Ki67（细胞核增殖抗原）与hTERT蛋白的阳性表达水平；hTERT TSPZYMED原位杂交SABC染色系统检测3组癌细胞中hTERT mRNA的阳性表达情况。 结果： 1、TANK1-ASODN对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用 连续注射15d后，反义组移植瘤生长抑制率为69.32％，疗效明显优于对照组（肿瘤呈进行性生长）和正义组（对肺癌细胞的抑制率小于40％）。处理第1d及第5d时3组移植瘤体积差异无显著性（P＞0.05）；第10d对照组移植瘤体 Tankyrase反义寡核酸抑制人肺癌细胞系生长作用的基础研究积明显大于正义组（P<0.01）及反义组（P<0.01），正义组移植瘤体积亦大于反义组（P<0 .01）;15d治疗完全结束后反义组移植瘤体积明显小于对照组 （P<0.01）及正义组（P<0 .01），而对照组与正义组移植瘤体积差异无显著性 （P）0 .05)。 2、3组肿瘤组织的组织学及细胞超微结构的改变 显微镜下观察注射TANKI反义寡核昔酸治疗组的肿瘤组织中，可见大量癌细胞发生变性、坏死。电镜结果显示反义组通过坏死、凋亡、胀亡等多种途径，有明显的癌细胞杀灭效果;正义组则有某种程度上的促进癌细胞分裂、繁殖及侵袭力的效果，但仅为一种倾向，未见肿瘤坏死、凋亡;对照组癌细胞呈旺盛生长，也未见癌细胞坏死及凋亡。 3、3组肿瘤组织中Ki67及hTERT蛋白的表达情况 3.1 Ki67蛋白的表达情况: 3组裸鼠肿瘤组织中均有Ki67蛋白阳性表达。对照组与正义组细胞核染色强度高于反义组。对照组、正义组及反义组LI分别为（81.90士5.13）%，（77.72士9.62）%，（47.52士4.62）%。3组Ll比较差异有非常显著性意义（xZ=752.91，P<0.01）:反义组Ll明显低于对照组(xZ=562.71，P（0.01）及正义组(x，=465.04，P（0.01），而对照组与正义组间相比差异无显著性（x’=3.51，P>0.05）。 3.2 hTERT蛋白的表达情况: 3组肿瘤组织中均有hTERT蛋白阳性表达。对照组、正义组肿瘤细胞染色质hTERT定位清楚，阳性程度高。反义治疗组肿瘤细胞呈现弱阳性表达，阳性细胞分布较稀少。3组裸鼠肿瘤细胞hTERT蛋白阳性表达率比较差异有非常显著性意义（x’二1246.50，P<0 .01）;反义组细胞阳性率明显低于对照组（x2=822.86，P<O.01）及正义组（xZ二949.09，P<0 .01）;而对照组与正义组间差异无显著性（xZ=0.13，P>.05）。 4、原位杂交检测3组癌细胞hTERT mRNA表达情况 3组肺癌组织中均有表达hTERT mRNA的阳性肿瘤细胞。对照组、正义组肿瘤细胞胞浆染色阳性程度高，反义治疗组肿瘤细胞呈现弱阳性表达，阳性细胞 2 ，l加kyrase反义寡核酸抑制人肺癌细胞系生长作用的基础研究分布较稀少。3组裸鼠肿瘤细胞hTERT mRNA阳性表达率总体比较差异有非常显著性意义(x’=839.14，P（0.01）;反义组肿瘤细胞hTERT mRNA阳性率明显低于对照组(x’=488.13，P（0.01）及正义组(x’=552.92，P（0.01），而对照组与正义组间差异无显著性（xZ=0 .32，P>o.05）。 5、Ki67与hTERT蛋白的细胞阳性标记率相关分析 两者的相关系数为Y=0 .9561，p<0 .01，表达呈高度正相关。结论:1、人肺癌细胞系CALU中Ki67蛋白、hTERT蛋白及其mRNA呈高水平表达，TANKI与hTERT表达异常增加可能是癌细胞增殖活跃的重要原因，这几种基因的表达异常可能在肺癌发生及恶性进展过程中发挥重要作用。2、TANKI一ASODN对裸鼠体内的CALU肺癌细胞的增殖具有明显的抑制作用，可有效降低肺癌细胞中Ki67蛋白、hTERT蛋白及其mRNA的表达水平，使端粒酶活性明显下调，细胞增殖活性显著下降，瘤细胞大量衰老、死亡。3、肺癌细?