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赤芝(Ganoderma lucidum)、冬虫夏草(Cordyceps sinensis)和羊肚菌(Morchella vulgaris)三种真菌类中药材在我国具有悠久的药用历史。蛋白类成分为三种真菌类中药材主要的化学组成部分,不仅具有良好的生物活性,而且有可能成为质量控制的指标之一,但是一直以来对三种真菌类药材中蛋白成分的研究相对较少。另一方面,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(2-DE)是蛋白质组学的经典技术。鉴于此,本课题以蛋白质为研究对象,采用SDS-PAGE和2-DE技术对赤芝、冬虫夏草和羊肚菌三种真菌类中药材中的蛋白类成分进行了分析研究。论文的第一部分为文献综述部分,首先综述了植物源活性蛋白的药理作用,然后总结了目前植物源活性蛋白的分析方法;最后对赤芝、冬虫夏草和羊肚菌三种真菌中药材进行了简要介绍。论文的第二部分为赤芝蛋白质的凝胶电泳分析。首先分别通过SDS-PAGE和等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶电泳(IEF-PAGE)技术分析14个产地赤芝样品的蛋白质组分,然后采用2-DE技术进一步分析赤芝的蛋白质组分。SDS-PAGE实验结果显示14个赤芝样品中蛋白质的分子量主要分布在15.0-92.7 kDa之间,所含的蛋白质条带数量以及部分样品的蛋白条带丰度存在较大差异;IEF-PAGE显示赤芝蛋白质的等电点主要分布在pI 4-7.5之间;2-DE结果进一步表明14个产地赤芝样品含有的蛋白点个数以及丰度存在差异,这一结果为进一步区分和比较不同产地赤芝提供依据。论文的第三部分为冬虫夏草蛋白质的凝胶电泳分析。首先通过SDS-PAGE和IEF-PAGE技术分别分析26个不同产地天然冬虫夏草样品中的蛋白质组分,接着考察了聚乙二醇(PEG)分级法提取虫草蛋白,最后通过2-DE技术进一步分析虫草全蛋白。SDS-PAGE结果显示26个产地虫草样品的蛋白质分子量主要分布在6.5-97.2 kDa之间,含有的蛋白条带数量以及光密度曲线分布基本相似,部分蛋白条带的丰度存在差异;IEF-PAGE结果显示26个虫草样品的等电点主要分布在4-7之间;10%PEG 4000分级提取蛋白结果显示PEG并不能增加虫草蛋白点被检测的数量且实验步骤较为繁琐;2-DE分析全蛋白获得的蛋白凝胶图谱显示26个样品含有的蛋白点个数和丰度存在较大差异,基于匹配的蛋白点以及相对应的表达值进行聚类分析,结果可将不同产地的虫草样品主要分为西藏和青海两大类。论文的第四部分为羊肚菌蛋白质的凝胶电泳分析(SDS-PAGE、IEF-PAG和2-DE)。SDS-PAGE结果显示TCA/丙酮法提取蛋白所获得的凝胶图谱背景较清晰,7个羊肚菌样品含有的蛋白条带以及光密度曲线基本相似;IEF-PAGE结果显示羊肚菌蛋白基本为酸性蛋白,其等电点主要分布在p I 4-7之间;2-DE结果显示羊肚菌样品含有的蛋白点个数和丰度存在较大差异。这一结果可为羊肚菌种类的鉴别及质量评估提供参考。论文的第五部分为结合2-DE和MALDI-TOF-MS/MS技术研究中药延胡索抗血小板聚集的信号通路。结果显示加药组与空白组之间共有52个差异蛋白(表达差异1.8倍以上),MALDI-TOF-MS/MS鉴定出51个蛋白,并发现这51个蛋白与细胞骨架、钙离子、血小板激活等信号通路相关。最终得出P2Y12受体可能是延胡索抗血小板聚集作用的直接靶点之一,之后介导Gαi信号传导来调节血小板聚集信号通路。第六部分是结论与展望,通过SDS-PAGE和2-DE技术区分和比较了不同产地的赤芝、冬虫夏草和羊肚菌,不仅可为三种真菌中药材的质量控制提供一定参考,也丰富了中药质量控制的指标性成分。另一方面,本文结合2-DE和MALDI-TOF-MS/MS研究了中药延胡索抗血小板聚集的信号通路,为后期研究中药延胡索活性成分的抗血小板聚集通路奠定了基础。