H<,2>O<,2>诱导原代培养的猪甲状腺细胞凋亡的实验研究

来源 :锦州医学院 辽宁医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jcd041991
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目的:通过研究H<,2>O<,2>诱导体外培养的猪甲状腺细胞凋亡,观测凋亡的动态变化,探讨不同浓度的H<,2>O<,2>与凋亡程度的关系,为H<,2>O<,2>代谢障碍而致甲状腺细胞破坏等疾病的研究提供详实的实验资料.方法:在无菌条件下,取成年健康猪甲状腺组织,用0.15﹪胰蛋白酶与1mmol/lEDTA的混合液37℃孵育30分钟,再经0.1﹪胶原酶37℃孵育1小时,尼龙网过滤,制成细胞悬液.细胞以高密度接种(1×10<6>cell/ml)获得单层,48小时后加入TSH以维持细胞分化表达.细胞培养48小时换液一次,共培养3天.然后与一定浓度H<,2>O<,2>(300μM)培养1-24小时,观察H<,2>O<,2>是否能诱导凋亡的发生及过程.在实验过程中利用放线菌酮(CHX)做阳性对照,同时测定不同浓度的H<,2>O<,2>(0μM,10μM,50μM,100μM,300μM)与细胞凋亡程度的关系.采用吖啶橙染色的方法,在荧光显微镜下观测凋亡细胞,并记录凋亡指数.所有的实验数据按不同的实验方法配对后,分别输入SPSS10.0统计软件包进行统计分析.结论:一定浓度H<,2>O<,2>能够诱导猪甲状腺细胞发生凋亡,且这种诱导作用时间短暂,并呈现浓度依赖效应关系.在甲状腺细胞代谢中,H<,2>O<,2>即可作为氧化剂又可作为凋亡诱导剂,从而成为代谢与凋亡的中间媒介把二者紧密联系起来.结果为临床研究H<,2>O<,2>代谢障碍与甲状腺细胞破坏性疾病的关系提供重要的参考依据.
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