神经细胞迁移和神经元轴突导向是神经系统发育过程中的重要问题，克隆相关基因和揭示信号转导机制至关重要。Slit蛋白和它的膜受体Robo是目前发现的与神经细胞迁移和神经元轴突导向有关的重要分子。有关Slit和Robo分子信号途径的研究已证明其下游存在多条细胞内信号通路。新近克隆的srGAP(Slit-Robo GTPase activating protein)家族是饶毅等利用酵母双杂交的方法，从小鼠cDNA文库中筛选与Robo分子可能有相互作用的蛋白时发现的，这个新家族包括三种srGAP分子，分别为srOAP1，srGAP2和srGAP3，分别相当于人类的KIAA1304，KIAA0456，KIAA0411。GAP分子可以加强小G蛋白内源性GTP酶的活性，使其转变为GDP结合的非活性状态。饶毅等的研究结果提示srGAP1是Rob01分子的细胞内效应分子，是传递Slit-Robo排斥信号途径的重要组成蛋白，细胞外Slit和Robol的结合可增加srGAP1与Robol的相互作用，导致srGAP1被激活，激活的srGAP1降低小G蛋白Rho家族分子之一CDC42的活性，促使肌动蛋白解聚，肌动蛋白在细胞内的不对称分布最终引起神经细胞的迁移和神经元轴突伸展方向的变化。除此以外，Endris等的研究还显示srGAP3分子可能与严重的智力发育迟缓有关，提示srGAP分子在脑内发挥的功能很复杂。 饶毅等人利用原位杂交技术研究了srGAPs mRNA在中枢神经第四军医大学硕上学位论文系统的分布，但S心AP蛋白在中枢神经系统(CNS)中的分布尚不清楚。因此我们制备了针对纯化的GST一srGAPs的兔多克隆抗体，该抗体的特异性利用抗原吸收实验鉴定。我们使用免疫组织化学染色的方法，对srGAPs分子在成年及不同发育阶段的正常大鼠脑内的分布模式进行了研究。 我们发现在成年大鼠脑内srGAP分子家族各成员的分布并不一致，srGAPI和srGAP3分子在成年大鼠脑内有广泛的表达，然而却没有检测到srGAPZ分子的表达。我们只能检#lJ到s心API和srGAP3分子在神经元内的表达，却未能在星形胶质细胞或寡突胶质细胞中检测到。srGAPI和srGAP3分子的亚细胞定位完全不同，srGAPI分布在细胞浆，而SrGAP3则主要定位于细胞核区域。 在发育过程中srGAP家族的三个分子广泛分布于脑内的神经元。并且都存在亚细胞定位的变化，SrGAPI在P1时定位于细胞核，逐渐向细胞浆转位，P7和P14时在细胞浆和细胞核中均有表达;srGAPZ在Pl和P7时主要定位于细胞浆，P14时在细胞浆和细胞核中均有表达;srGAP3分子在发育过程中的亚细胞定位也发生了明显变化，Pl时主要定位于细胞浆，P7和P14时在细胞浆和细胞核中均有表达，在海马结构的发育过程中表达强度也发生了改变，在海马和齿状回，s心AP3分子在Pl时的表达不明显，P7时海马的表达显著增强，P14和成年的表达与之相仿，齿状回的表达在P14时开始增强，到成年时的表达最强。 以上研究结果表明，srGAPs可能不仅与发育阶段轴突的导向和细胞迁移有关，在成年大鼠脑内也有其他重要的作用，比如突触的可塑性等等。s心AP家族各成员的亚细胞定位的不一致可能提示它们的功能也存在一定的差异。s到3APs在发育过程中存在亚细胞定位和表达量的改变，提示srG妙分子在发育过程中的表达受到时间和空间上的紧密调控，这与其下游特异的Rh。家族分子共同形成了复杂的信号网络，对来自周围环境中的多种不同信号进行整第四军医大学硕士学位论文合，作出快速而正确的反应，从而保证了复杂的神经网络能够有效而精确的形成。以上结果说明了srGAP分子的复杂性，还需要进一步研究来揭示srGAP分子的信号转导机制和多种功能。