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第一章目的建立体外细胞缺氧模型,观察缺氧对肝癌SMMC-7721细胞IGF-1R、HIF-1a、VEGF蛋白及mRNA表达和对细胞生存活力的影响。方法以肝癌SMMC-7721细胞为实验材料,采用二氯化钴(CoCl2)建立体外细胞缺氧模型,对SMMC-7721细胞进行不同浓度及不同时间CoCl2诱导缺氧。应用CCK-8观察氯化钴对SMMC-7721细胞活力的影响,利用ELASA法检测缺氧下细胞培养液中VEGF的表达量,采用Western-blotting和RT-PCR观察不同缺氧条件下IGF-1R、HIF-1a、VEGF蛋白和mRNA表达情况。结果氯化钴诱导的缺氧SMMC-7721细胞生存活力存在时间和浓度相关性,随着浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,随着处理时间的延长,细胞抑制率也逐渐增加,ELISA结果显示12小时处理的细胞,随着氯化钴浓度的增加,SMMC-7721细胞VEGF蛋白表达量逐渐增加,200mmol/L时达到峰值,再增加浓度,表达量下降,随着氯化钴处理时间的延长,VEGF表达量逐步增加,Western-blotting、RT-PCR结果显示,与常氧条件下细胞相比,适宜的增加浓度及处理时间诱导SMMC-7721细胞,可使IGF-1R、VEGF蛋白、mRNA及HIF蛋白表达增加,统计学分析P<0.05,相关性分析结果显示,HIF蛋白和VEGF蛋白与缺氧诱导量效关系和时效关系成正相关性。结论缺氧条件下HIF-1a蛋白和IGF-1R、VEGF蛋白、mRNA表达较常氧下显著增加。HIF-1a蛋白和VEGF蛋白与低氧诱导量效关系和时效关系有正相关性。第二章目的探究姜黄素能否经IGF-1R通路抑制缺氧诱导的肝癌7721细胞VEGF蛋白表达,并且对其机制进行研究。方法设六组,A:常氧组;B:缺氧组;C缺氧+姜黄素组;D缺氧+姜黄素+MAPK通路抑制剂PD98059;E:缺氧+姜黄素+PI-3K信号通路抑制剂LY294002;F:缺氧+姜黄素+LY94002+PD98059,采用CCK-8法检验姜黄素对低氧诱导的肝癌7721细胞生存活力的影响,采用ELASA法检测各组细胞培养液中VEGF的表达量,Western-blotting和RT-PCR检测IGF-1R、HIF-1a、VEGF蛋白和mRNA及Akt和Erk1/2磷酸化表达情况。结果CCK-8:姜黄素10?mol/L,处理12小时后开始对肝癌SMMC-7721细胞生存活力有抑制作用,P<0.05,ELISA结果:与A组相比,B组VEGF表达增加,与B组相比,D、E、F组VEGF表达均减少;Western-blotting:与B组相比C、D、E、F组IGF-1R、HIF-1a、VEGF蛋白表达均下降,与c组相比E、F组IGF-1R、HIF-1a、VEGF蛋白表达均下降,p<0.05;RT-PCR:与B组相比,C、D、E、F组IGF-1R、VEGF表达均减少,P<0.05。结论姜黄素对低氧肝癌SMMC-7721细胞VEGF表达的调控可能通过IGF-1R/PI3K信号通路。