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目的通过建立豚鼠耳毒性模型,明确水杨酸钠(sodium salicylate,SS)能诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion neuron,SGN)凋亡,并探究程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)、程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)在其中的表达及意义,以期阐明水杨酸钠耳毒性的可能机制并为治疗耳鸣找到新的药物靶点。方法筛选听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)正常(ABR阈值<40dBSPL)、畸变产物耳声发射(distortion product otoacoustic emissions,DPOAEs)能引出的健康豚鼠,共三十只(六十只耳),采用随机数字表法,分成五组,每组六只。A组:正常对照组(给予生理盐水);B组:给SS2小时组;C组:给SS3天组;D组:给SS 7天组;E组:给SS 14天组。其中,给药量为每天每千克400毫克,生理盐水和SS的给药方式均为腹腔注射。每组豚鼠均于给药后再次行ABR、DPOAE检测,随后立即过量麻醉处死,取出两侧耳蜗。每组左侧耳蜗做石蜡切片行以下检测:①苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察SGN细胞的数量、形态大小等;②利用免疫组织化学技术,检测PD-1、PD-L1在耳蜗中的表达;③采用原位末端标记技术(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),研究 SGN细胞凋亡情况。每组右侧耳蜗行硝酸银染色基底膜铺片,观察毛细胞的排列及数量。最后,采用统计学软件(statistical product and service solutions,SPSS)20.0,对实验数据进行分析处理。结果1.听力学检测结果:分析各波的ABR阈值,A组给药前后比较,左右耳差异均无统计学意义(p>0.05);B、C、D、E组给药后分别与给药前比较,ABR阈值均升高,差异均有统计学意义(p<0.05);然而,B、C、D、E组给药后,各组间进行比较,左右耳差异均无统计学意义(p>0.05)。DPOAE结果,波形除在A组左右耳均能正常引出外,B、C、D、E组均出现幅值减低或波形不通过。2.HE染色情况:显微镜下观察,A组可见SGN细胞数量多、排列有序、细胞结构清晰可辨,蓝染的细胞核大且圆,红染的细胞质饱满,染色均一;B组可见SGN细胞仍较大,细胞核与细胞质形态不及A组清晰;C组可见SGN细胞数量仍较多,但细胞核染色不均一,出现核碎裂和核溶解的情况;D组观察到SGN细胞较之前几组(A、B、C组)数量、形态均出现明显的改变,细胞小而少,可见核固缩、溶解;E组可见SGN细胞小,形态不规则,数量减少,周围组织稀疏,同时有明显的核固缩、核溶解甚至消失的现象。3.TUNEL实验结果:显微镜下观察,A组未见明显SGN凋亡细胞,B组可见少量阳性着色SGN细胞,C组出现较多SGN凋亡细胞,D、E组SGN凋亡细胞明显增多,各组间进行比较,随SS给药时间的延长,凋亡指数升高,差异有统计学意义(p<0.05)。4.免疫组织化学结果:显微镜下观察,A组中SGN细胞PD-1、PD-L1阳性表达明显;B、C、D、E组与A组相比,SGN细胞PD-1、PD-L1阳性表达均减少,差异有统计学意义(p<0.05)。5.硝酸银染色耳蜗基底膜铺片结果:A组毛细胞排列整齐,无数量缺失;B组外毛细胞排列紊乱,内毛细胞无明显改变;C组外毛细胞出现个别缺失;D组缺失的外毛细胞数量增多;E组外毛细胞出现大片缺失,细胞轮廓不清,内毛细胞无明显改变。结论1.SS给药会引起豚鼠ABR阈值升高。2.SS诱导豚鼠耳蜗SGN细胞凋亡,PD-1/PD-L1可能参与了这一凋亡过程。3.SS给药会引起耳蜗毛细胞的缺失及结构的破坏,且与给药时间有关。