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[目的]
1.采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，对护骨胶囊的多种成分进行定性和定量分析，为护骨胶囊的药效研究提供质量控制的基础。
2.观察护骨胶囊对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化的影响，探讨其体外促成骨分化的作用机制。
[方法]
1.采用RP-HPLC，KromasilC18色谱柱(5.0μm,250mm×4.6mm)，流动相为乙腈-1％冰醋酸，梯度洗脱，流速:0.8ml/min，柱温:30℃，检测波长:320nm，通过护骨胶囊全方图谱分别与组方药物所含绿原酸、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、淫羊藿苷等对照品图谱、组方药物图谱进行比对，确认护骨胶囊图谱中各成分的归属。
2.采用RP-HPLC，KromasilC18色谱柱(5.0μm,250mm×4.6mm)，流动相为甲醇—乙腈—1％冰醋酸，梯度洗脱，流速:0.8 ml/min，柱温:30℃，检测波长:320nm，建立护骨胶囊中的主要成分绿原酸、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、淫羊藿苷的定量测定方法。
3.采用MTT法、碱性磷酸酶法分别地检测护骨胶囊对成骨细胞增殖和分化的作用;采用SYBR greenⅠ嵌合的RT-PCR方法检测BMP-2和Runx2 mRNA表达水平。
[结果]
1.建立的HPLC-DAD方法可在一个色谱条件下，得到护骨胶囊全方及10个组方药物的多成分定性测定图谱，明确了全方指纹图谱中13个特征峰的归属;以4种对照品为对照，可确定全方中4个色谱峰所代表的化合物（绿原酸、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、淫羊藿苷）。
2.对全方多成分测定方法进行验证，可定量测定4种化合物，色谱峰分离情况良好，绿原酸、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、淫羊藿苷四个成分可达到定性、定量的要求。绿原酸在0.018μg～0.121μg(r=0.9996)、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.103μg～0.689μg(r=0.9999)、阿魏酸在0.031μg～0.208μg(r=0.9992)、淫羊藿苷在0.107μg～0.710μg(r=0.9996)范围内，线性良好。它们的精密度RSD分别为0.99％，0.11％，0.38％，0.60％，稳定性RSD分别为1.03％，0.11％，0.75％，0.41％，重复性RSD分别为2.05％，2.38％，2.59％，1.40％，平均回收率分别为97.9％(RSD=1.72％)，97.4％(RSD=1.20％),99.4％(RSD=1.14％),98.6％(RSD=1.33％)。
3.护骨胶囊在浓度0.025μg/ml～2.5μg/ml内对成骨细胞有促增殖作用，护骨胶囊在浓度0.025μg/ml～25μg/ml内对碱性磷酸酶的活性均有提高，护骨胶囊在浓度25μ g/ml对BMP-2和Runx2 mRNA水平均有上调的作用。
[结论]
1.所建立HPLC测定方法准确、简便、重现性好，可实现一个HPLC色谱条件下对护骨胶囊全方多个主成分的定性考察，提高了该复方制剂质量控制的水平。
2.所建立HPLC测定方法准确、简便、重现性好，可实现一个HPLC色谱条件下对护骨胶囊全方中多个主成分的定量考察，可用于护骨胶囊多成分定量检测，提高了该复方制剂质量控制的水平。
3.护骨胶囊对成骨细胞有促增殖、促分化的作用，促分化作用可能与激活BMP-2细胞信号通路，上调BMP-2和Runx2 mRNA的表达水平有关。