目的宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一。其传统治疗主要以手术和放疗为主,可使部分患者得到根治或缓解。近年宫颈腺癌发病有逐渐增加趋势,且宫颈腺癌单纯手术或放疗后易短期内复发或转移,对化疗亦不敏感,故预后不良。因此为改善预后,临床迫切需要探讨对宫颈腺癌更为有效的方法。近年来报道新辅助化疗（即术前或放疗前的化疗）和同步放化疗等一些新的治疗手段,可减少病灶的体积,消除亚临床转移,提高手术或/和放疗的效果。故目前化疗与放疗的联合已成为肿瘤治疗方面的研究重点。5-氟尿嘧啶（5-Fu）被广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗,也是宫颈癌新辅助化疗的常用药物之一,并且还有一定的放射增敏效果。本实验从凋亡角度入手,应用MTT法、流式细胞术、荧光显微镜等方法,研究了5-氟尿嘧啶（5-Fu）和放射线联合应用对人宫颈腺癌Hela细胞凋亡的影响。材料与方法一、实验材料1、细胞株人子宫颈腺癌Hela细胞株由中国医科大学盛京医院感染科实验室提供。2、试剂Annexin V/PI试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司二、实验方法人宫颈腺癌Hela细胞株单层贴壁培养于1640培养液中,放37℃、饱和湿度、5%CO₂的培养箱中传代培养。应用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度的5-Fu对人宫颈腺癌Hela细胞的增殖抑制情况,筛选出5-Fu作用Hela细胞48小时的IC₅₀。取对数生长期人宫颈腺癌Hela细胞,按1×10⁶个/ml将单细胞悬液2 ml接种至6孔细胞培养板中,培养24小时。将细胞随机分为空白对照组,单纯化疗组（单纯5-Fu组）,单纯放疗组（单纯放射线组）及放化疗联合组（5-Fu和放射线联合应用组）4大组。空白对照组不进行任何处理,单纯化疗组用通过MTT法得到的5-Fu对宫颈腺癌Hela细胞的IC₅₀及大于IC₅₀浓度的5-Fu分别处理Hela细胞,单纯放疗组按X线照射的不同剂量分成2 Gy,4 Gy,6 Gy放射组。5-Fu和放射线联合组先进行放射线的照射分别为2 Gy、4 Gy、6 Gy三个剂量,照射后根据分组情况马上加入不同浓度的5-Fu。继续培养24及48小时后,离心收获细胞。以磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤后,采用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白（Annexin V）和碘化丙啶（PI）染色,置于流式细胞仪上进行细胞凋亡检测,然后于荧光显微镜下观察,照像。三、统计学处理数据使用SPSS 13.0进行处理,采用均数士标准差形式表示数据,组内比较采用配对t检验,组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05表示有统计学意义,P＜0.01表示有非常显著的统计学意义。结果1、MTT法检测5-Fu对宫颈腺癌Hela细胞的IC₅₀为125μg/ml。2、单纯5-Fu,单纯放射线及5-Fu和放射线联合都可诱导Hela细胞凋亡,5-Fu和放射线联合后可明显增加Hela细胞的凋亡。3、在荧光显微镜下可以观察到凋亡细胞。结论本实验结果表明,5-Fu和放射线联合应用可明显增加人宫颈腺癌Hela细胞的凋亡,为临床应用提供理论依据。