目的：　　以自然衰老大鼠为模型，研究五子衍宗方（Wuzi yanzong prescription, WZ）对老龄大鼠睾丸生殖功能衰退的改善作用，并从调节精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）增殖分化角度探讨其机制，以期为防治因年龄增长而导致的生殖功能衰退提供新方向。　　方法：　　以SPF级SD雄性大鼠为研究对象，将40只18月龄大鼠随机分为老龄模型组， WZ低、中和高剂量组，每组10只。另购买2月龄大鼠10只作为青年对照组。WZ低、中和高剂量组分别灌胃给予五子衍宗方0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg，同时老龄模型组、青年对照组分别灌胃给予相应生理盐水，每周停药2天，连续给药4个月。结束给药后称重麻醉处理大鼠，观察以下指标：　　（1）称取睾丸质量，计算睾丸指数；　　（2）HE染色观察大鼠睾丸组织病理变化；　　（3）ELISA法检测大鼠睾丸组织中睾酮（T）含量；　　（4）生化法检测睾丸中SOD、GSH活力和MDA水平；　　（5）电镜观察Sertoli细胞超微结构；　　（6）免疫荧光法检测Sertoli细胞数量；　　（7）RT-qPCR和Western Blot法检测大鼠Sertoli细胞相关分泌因子GDNF、PLZF、BMP4和SCF mRNA和蛋白表达水平；　　（8）免疫荧光法检测SSCs数量及增殖相关蛋白PCNA表达；　　（9）Western Blot和免疫荧光法检测SSCs增殖相关信号通路p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白的表达与定位；　　（10）免疫荧光法检测SSCs分化相关蛋白c-kit表达与定位；　　（11）Western Blot和免疫荧光法检测SSCs分化相关信号通路PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达与定位。　　结果：　　（1）与青年对照组大鼠比较，老龄模型组大鼠睾丸重、睾丸指数、T含量显著降低，WZ低、中、高剂量组均能不同程度升高睾丸重、睾丸指数、T含量；　　（2） HE结果显示，老龄模型组大鼠生精细胞层数减少，间隙增大，且有部分细胞发生脱落，生精小管病理变化明显，而WZ能够明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态结构；　　（3）生化法检测结果发现，与青年对照组比较，老龄模型组睾丸组织SOD、GSH活力下降，MDA含量升高，而WZ干预后，SOD、GSH活力明显上升，MDA含量下降；　　（4）电镜结果显示，青年对照组大鼠睾丸组织内Sertoli细胞胞浆完整，可见丰富的内质网和线粒体；老龄模型组Sertoli细胞细胞器不发达，胞浆内有明显空泡，缺少丰富的内质网和线粒体，且内质网出现肿胀，线粒体出现峭紊乱、空泡化现象；而WZ各剂量组均可不同程度地改善Sertoli细胞超微结构的病变；　　（5）免疫荧光结果显示，各组大鼠Sertoli细胞数量未见明显差异；　　（6）RT-qPCR和Western Blot结果显示，与青年对照组比较，自然衰老组大鼠睾丸组织中GDNF、PLZF、BMP4和SCF mRNA和蛋白表达水平均显著降低，而WZ干预后，GDNF、PLZF、BMP4和SCF表达水平显著升高；　　（7）免疫荧光结果显示，与青年对照组比较，老龄模型组中SSCs减少，PCNA表 达下降，WZ处理后，SSCs数量增多，PCNA表达上调；　　（8）Western Blot和免疫荧光结果显示，SSCs增殖相关信号通路蛋白p-JAK2、p-STAT3表达降低，WZ处理后，　　p-JAK2、p-STAT3表达明显增多；　　（9）免疫荧光结果显示，老龄模型组中SSCs分化相关蛋白c-kit表达明显减少，WZ处理后，c-kit表达明显增多；　　（10）Western Blot和免疫荧光结果显示，WZ可以明显提高SSCs分化相关信号通路蛋白PI3K和p-Akt的表达。　　结论：　　WZ能够明显改善衰老所致睾丸生殖功能衰退，其作用机制可能与增强Sertoli细胞分泌功能，改善精原干细胞niche，促进老龄大鼠SSCs增殖分化有关。