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目的：研究TLR4与协同刺激分子B7-H3在人肠癌细胞株SW480中的表达水平，探讨siRNA对TLR4的干扰效率及TLR4、B7-H3表达的影响。方法：1.实时荧光定量PCR检测TLR4、B7-H3表达水平方法学的建立。取对数生长期结肠癌SW480细胞，离心柱法提取细胞RNA，实时荧光定量PCR方法分别检测TLR4与B7-H3的表达水平，每个浓度点设3个复管，分别建立标准曲线与熔解曲线；2.siRNA干扰TLR4表达实验体系的建立及其干扰效率的研究。取对数生长期结肠癌SW480细胞，以2×105个/孔接种于6孔板进行转染，用不同浓度TLR4siRNA与LipofeetamineTM2000混合形成转染复合物，使转染试剂终浓度为60nmol/L、80nmol/L、100nmol/L。6h后换液，于培养箱中分别孵育24h、48h后收集细胞。离心柱法提取细胞RNA，紫外分光光度剂检测总RNA含量和质量。各取1ug总RNA逆转录成cDNA，然后进行实时荧光定量PCR反应，筛选出siRNA沉默TLR4表达的最佳转染时间与转染浓度。根据最佳转染条件进行TLR4与B7-H3荧光实时定量PCR检测与普通PCR琼脂糖凝胶电泳产物分析。结果：1.TLR4基因扩增效率为100.9％，相关系数R2为0.982；B7-H3基因扩增效率为100.8％，相关系数R2为0.993；β-actin基因扩增效率为100.4％，相关系数R2为0.995。经熔解曲线分析，TLR4熔解温度为81.5℃，B7-H3熔解温度为85℃，β-actin熔解温度为90℃，三个基因片段的熔解曲线均呈单峰，扩增曲线呈典型的S型动力学曲线；2.siRNA在24h、80nmol/L时，TLR4Ct值为27.72，较未干扰组（25.96）明显增加，差异有统计学意义(P<0.01)。与阳性对照组、NC siRNA组相比，TLR4siRNA组TLR4、B7-H3Ct值明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)，其余两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳显示TLR4siRNA组在PCR扩增时TLR4、B7-H3不能明显被检出，而阳性对照组、NC siRNA组则扩增条带清晰。结论：1.建立了TLR4与B7-H3实时荧光定量PCR的方法；2.TLR4与B7-H3均表达于肠癌SW480细胞，TLR4基因的沉默可导致B7-H3表达水平的下调，提示TLR4对B7-H3的表达具有一定的调控作用。