对虾RhoA基因在抗病毒免疫中的作用初步研究

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对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是一种具有囊膜、无包涵体的杆状型双链环状DNA病毒,也是危害对虾养殖业的最主要病原。RhoA属于小GTPase蛋白家族的一员,它在细胞中存在着GTP结合和GDP结合两种形式,在细胞内起着分子开关的作用,可调节细胞骨架、影响细胞极性、微管活力、细胞膜运输途径和转录因子活性调节。有报道一些病毒蛋白可以和RhoA结合阻断其下游信号途径ROCK和mDia等因子,从而对病毒的释放,形态及病毒诱导的细胞运动产生影响。本实验室之前的工作利用抑制性差减杂交(Suppression SubtractiveHybridization,SSH),发现了抗病毒虾中PjRhoA的表达量增强。本论文首先克隆了PjRhoA基因的全长,对该基因序列进行了生物信息学分析,该基因包含RhoA家族必须的GTP结合域,ROCK结合位点,以及GAP,GEF and GDI结构域。蛋白序列比对发现其与其他六种模式动物之间的同源性高达92.98%。通过RT-PCR检测各个组织中PjRhoA的分布,发现该基因在对虾心脏、肌肉、肝胰腺、肠、腮和血液中都有分布,病毒感染不同时相检测该基因表达量变化发现该基因在病毒感染12小时后表达量增加,感染48小时达到最高,之后又减少。dsRNA干扰通过活体注射双链RNA在mRNA水平上抑制RhoA,病毒极早期基因的表达量增加。用RhoA信号转导途径下游ROCK的特异性抑制剂Y-27632抑制其信号通路,抑制状态下病毒极早期基因的表达量也得到增加。上述研究表明PjRhoA在对虾抗病毒防御系统中的发挥着重要作用。
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