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背景消退素(resolvins,Rvs)是来源于ω-3多不饱和脂肪酸的内源性促炎症消退介质,包括D系和E系消退素,在多种炎性动物模型中具有抗炎和促炎症消退作用。最近的研究发现Rvs还能通过调节各种瞬时受体电位通道的活性、促炎因子和抗炎介质的表达及中枢敏化的形成等有效减轻炎性疼痛、术后疼痛和神经病理性痛。脊髓胶质细胞、小胶质细胞内的p-p38 MAPK和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)及其受体原肌球蛋白相关激酶B(tropomyosin-related kinase B,Trk B)在神经病理性痛的形成中发挥重要作用,而烧伤疼痛含有神经病理性痛的成分。因此,它们可能也参与烧伤疼痛的形成。体内外研究表明Rvs可以抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的活化,抑制小胶质细胞内p38 MAPK磷酸化,减少其分泌炎性介质。因此,我们提出假说消退素D1(resolvin D1,Rv D1)可能通过抑制脊髓背角内胶质细胞活化、小胶质细胞内p38 MAPK磷酸化、下调BDNF/Trk B受体信号,从而减轻烧伤疼痛。目的本研究通过建立大鼠烧伤模型、腹腔注射Rv D1探索Rv D1在烧伤疼痛中的作用及其机制;通过鞘内注射SB203580抑制p38 MAPK活化,观察烧伤大鼠的痛行为学变化,检测脊髓背角Iba-1、BDNF和Trk B的表达水平的变化,从而探讨p38 MAPK活化在Rv D1对于烧伤疼痛作用机制中所发挥的作用;通过鞘内注射Trk B-Fc抑制BDNF/Trk B信号,观察烧伤大鼠的痛行为学变化,检测脊髓背角Iba-1和p-p38 MAPK的表达水平的变化,从而探讨BDNF/Trk B信号在Rv D1对于烧伤疼痛作用机制中所发挥的作用。方法1.140~150g清洁级雄性SD大鼠用随机数字表法分为5组(n=6):假伤组(Sham+Veh1组),烧伤组(Burn+Veh1组),烧伤+Rv D1低剂量组(Burn+R(S)组),烧伤+Rv D1高剂量组(Burn+R(L)组),假伤+Rv D1高剂量组(Sham+R(L)组)。制备烧伤模型,于烧伤前30min及烧伤后1-7d分别腹腔注射100ng、300ng Rv D1或对照溶剂Veh1。分别于烧伤前1d和烧伤后1、3、5、7、14d测定大鼠机械缩足反应阈(MWT)。于烧伤后7d MWT测定结束后处死3只大鼠,用荧光免疫组化检测脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞标记物Iba-1和GFAP、p-p38MAPK、BDNF/Trk B的表达水平。用免疫荧光双标检测p-p38 MAPK分别与Iba-1、GFAP和Neu N的共标情况。2.140~150g清洁级雄性SD大鼠用随机数字表法分为5组(n=6):Sham+Veh2组,Burn+Veh2组,Burn+SB203580组,Sham+SB203580组,Burn+R(L)组。制备烧伤模型,于造模后7d分别鞘内注射SB203580或对照溶剂Veh2,Burn+R(L)组腹腔注射Rv D1方法同前。分别于鞘内注药前、鞘内注药后15min、30min、1h和2h测定大鼠MWT。大鼠MWT测定结束后处死3只大鼠,用荧光免疫组化检测脊髓小胶质细胞标记物Iba-1和BDNF/Trk B的表达水平。3.140~150g清洁级雄性SD大鼠用随机数字表法分为5组(n=6):Sham+Veh3组,Burn+Veh3组,Burn+Trk B-Fc组,Sham+Trk B-Fc组,Burn+R(L)组。制备烧伤模型,于造模前1h和造模后1-7d用微量注射器通过鞘内置管分别给予Trk B-Fc或对照溶剂Veh3,Burn+R(L)组腹腔注射Rv D1方法同前。分别于烧伤前1d和烧伤后1、3、5、7、14d测定大鼠MWT。于烧伤后7d MWT测定结束后处死3只大鼠,用荧光免疫组化检测脊髓小胶质细胞标记物Iba-1和p-p38 MAPK的表达水平。结果1.与Sham+Veh1组比较,Burn+Veh1组烧伤后各时点MWT降低(P<0.05);与Burn+Veh1组比较,Burn+R(S)组和Burn+R(L)组烧伤后各时点MWT均升高(P<0.05);与Burn+R(S)组比较,Burn+R(L)组烧伤后各时点MWT升高(P<0.05)。免疫荧光显示,与Sham+Veh1组比较,Burn+Veh1组脊髓背角Iba-1、GFAP、p-p38 MAPK、BDNF和Trk B受体表达水平均升高(P<0.05);与Burn+Veh1组比较,Burn+R(L)组脊髓背角Iba-1、GFAP、p-p38 MAPK、BDNF和Trk B受体表达水平均降低(P<0.05)。免疫荧光双标显示,p-p38 MAPK只与Iba-1共标,而不与GFAP和Neu N共标。2.与Sham+Veh2组相比,Burn+Veh2组MWT降低(P<0.05);与Burn+Veh2组相比,Burn+SB203580组MWT升高(P<0.05);与Burn+SB203580组注药后各时点相比,Burn+R(L)组MWT差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光显示,与Sham+Veh2组相比,Burn+Veh2组和Burn+SB203580组Iba-1、BDNF和Trk B受体表达水平均升高(P<0.05);与Burn+Veh2组相比,Burn+SB203580组Iba-1、BDNF和Trk B受体表达水平均降低(P<0.05)。3.与Sham+Veh3组相比,Burn+Veh3组烧伤后各时点MWT降低(P<0.05);与Burn+Veh3组相比,Burn+Trk B-Fc组注药后MWT升高(P<0.05);与Burn+Trk B-Fc组相比,Burn+R(L)组MWT差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光显示,与Sham+Veh3组相比,Burn+Veh3组和Burn+Trk B-Fc组Iba-1和p-p38MAPK表达水平均升高(P<0.05);与Burn+Veh3组相比,Burn+Trk B-Fc组Iba-1和p-p38 MAPK表达水平均降低(P<0.05)。结论消退素D1(resolvin D1,Rv D1)可通过抑制脊髓背角内胶质细胞活化、小胶质细胞内p38 MAPK磷酸化、下调BDNF/Trk B受体信号的表达,从而减轻烧伤疼痛。