MicroRNA-363在肾透明细胞癌中的表达及其靶基因研究

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目的:评估miR-363在不同肾组织和不同肾细胞株之间的表达差异,初步判断miR-363在肾癌的发生和进展中可能扮演的角色,同时利用Targetscan预测miR-363的靶基因为后续的功能研究做准备。  材料和方法:收集中国人民解放军总医院37例配对的肾透明细胞癌肿瘤与癌旁组织标本。培养正常人肾近曲小管上皮细胞株HKC、HK2和人胚肾细胞系293T以及肾透明细胞癌细胞株786-O、769P、Caki-1、SN12-PM6。逆转录miR-363为cDNA模板,荧光定量PCR采用SYBER Green染料法比较Ct值。Targetscan预测miR-363的靶基因,荧光素酶实验验证,检测其在肿瘤与瘤旁组织中的mRNA表达差异。  结果:miR-363在瘤旁组织中较肿瘤组织中高表达,且具有统计学意义。miR-363在正常细胞株HKC、HK2中较肿瘤细胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6高表达。软件预测其靶基因为FNIP1,荧光素酶实验表明,miR-363能够通过作用于FNIP1基因的3-UTR的特定位点,对其表达进行负性调节。FNIP1在瘤旁组织中较肿瘤组织中低表达,且具有统计学意义。FNIP1在肿瘤细胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6较正常细胞株HKC、HK2中高表达。  结论:miR-363可能在肾癌的发生发展中发挥着重要的作用,抑制肾癌发生,荧光素酶实验表明,miR-363能够通过作用于FNIP1基因的3-UTR的特定位点,对其表达进行负性调节。这可能是miR-363发挥抑制肾癌发生作用的一个机制。
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