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一、研究背景胰腺癌(Pancreatic carcinoma，PCa)毫无疑问是目前最恶性也最致命的肿瘤。早期转移至局部区域淋巴结和经血液循环转移至远处器官可能是导致其5年生存率极低的原因(小于5%，为所有肿瘤中最低)。针对胰腺癌的肿瘤成瘤和进展，众多分子被广泛的描述和研究，CD44就是最重要的分子之一。CD44的结构和功能都非常复杂，该分子是由20个外显子编码，通过选择性剪接而产生CD44标准体(CD44s)和CD44变异体(CD44v)。CD44标准体由CD44外显子1至外显子5及外显子16至外显子20组成。而CD44变异体分为CD44v1-CD44v10(CD44v1在人类不表达)，分别由对应的外显子6至外显子15编码而成，这些外显子可以通过选择性剪接单个的或多个的和CD44的标准体组合进而可能产生数千种不同的CD44亚型，每种CD44亚型可能作用不同，因此，CD44结构和功能都很复杂。CD44最早被认为是一种淋巴细胞归巢受体和跨膜糖蛋白，表达于胚胎干细胞，造血干细胞及肿瘤干细胞。尽管CD44在很多细胞的进程，包括细胞增殖，分化，运动等方面发挥重要作用，关于CD44变异体和标准体在肿瘤中发挥的作用却众说纷纭，观点不一。在一些肿瘤中，CD44变异体和标准体被认为是肿瘤促进因子，但在另外一些肿瘤中，有报道却认为CD44变异体和标准体是肿瘤抑制因子。这些相互较为矛盾的结论笔者认为一是由于他们针对CD44的研究方法不一，例如有些用免疫组化(immunohistochemistry, IHC)有些用PCR方法；二是在不同肿瘤中研究对象为不同的CD44变异体或亚型。CD44在胰腺癌的作用仍然有所争议。Tsukuda, H报道CD44v6和CD44v2表达在胰腺癌患者的胰液中，但是作者也报道正常人群的胰液也表达CD44v。Rall,C. J.研究了21例临床胰腺癌组织CD44的表达，发现有CD44v6，CD44v8-9，CD44v8-10和CD44s的表达，其中仅CD44v6的表达与胰腺癌的转移相关。Tomaszewska, R则研究发现胰腺癌有CD44v6和CD44s的表达。Gotoda, T等人通过免疫组化方法研究了CD44v6，CD44v2和CD44s在胰腺癌的表达，发现CD44v6和CD44v2是预测不良预后的有用指标。然而，没有报道发现CD44s和胰腺癌的进展有相关。实际上，到目前为止，尚无系统性的在胰腺癌研究CD44的所有亚型的报道。为了研究CD44的所有亚型表达模式是否与胰腺癌的转移和预后相关，我们用一种新的方法设计了CD44所有亚型(包括CD44v2-CD44v10和CD44s)的特异引物，在101例临床胰腺癌标本中检测了CD44所有亚型的表达，分析了他们的表达模式与胰腺癌的临床因素，预后之间的相关关系。二、研究方法1.在第三军医大学，西南医院肝胆外科共收集了101例胰腺癌患者，所有收集的临床标本的患者均进行了治愈性的胰十二指肠切除术或保留幽门的胰十二指肠切除术，均清扫了淋巴结，时间跨度从2008年至2010年。上述收集的病例均未进行放疗或者化疗。这些患者标本的CD44v2-CD44v10和CD44s及相关详细的临床资料得以分析。2. As(Aspc-1)，Cf(Cfpac-1)和Pa(Panc-1)三株胰腺癌细胞株从中国科学院上海细胞所购买，所有的细胞以10%胎牛血清配以双抗(青霉素、链霉素)培养，培养温度为37度，5%CO2，我们用transwell的方法对这些细胞的侵袭能力进行了检测。3.我们用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)方法对101例患者的新鲜冰冻标本的CD44v2-CD44v10和CD44s的表达作了检测，我们用卡方检验分析了它们的表达量与患者的临床相关资料的相关性，相关数据若为正态分布方差齐性则用T检验，否则我们采用非参数检验。单因素生存分析采用KM法(KM method)，多因素分析采用Cox多因素逐步回归(向前，极大似然法)。P值小于0.05认为有统计学差异。三、研究结果1.在三株胰腺癌细胞中，CD44v的表达量由高到低依次为As，Cf和Pa，而CD44s的表达量由高到低依次是Pa，Cf和As，表明胰腺癌细胞表达不同水平的CD44v和CD44s。另外，细胞侵袭实验表明As细胞的侵袭力最高，Cf次之，Pa的侵袭力最低。以上的这些结果表明CD44v的高表达和CD44s的低表达可能和胰腺癌细胞的侵袭力相关。在患者标本中，与非肿瘤组织相比，胰腺癌组织表现出CD44v的高表达和CD44s的低表达(其中CD44v5，CD44v6，CD44v9，CD44v10和CD44s有统计学差异)。另外，在转移性的标本中也发现了CD44v的高表达和CD44s的低表达(其中CD44v6和CD44s有统计学差异)。2.在101例临床组织中，CD44v6+和CD44v9+和淋巴结转移肝转移，TNM分期相关，而CD44s-和肝转移，分化程度，TNM分期相关。然而，其他CD44亚型如CD44v2-CD44v5+，CD44v7+，CD44v8+和CD44v10+未发现与临床参数有统计学相关性。3. KM生存曲线分析发现CD44v6+和CD44v9+的患者有更低的临床生存。相反，CD44s-患者也有更低的临床生存。CD44v2-CD44v5+，CD44v7，CD44v7和CD44v10+为发现对生存有影响。而且，CD44v6+/CD44s-和CD44v9+/CD44s-的患者的生存率比单独表达CD44v6+, CD44v9+和CD44s-的更低，而CD44v6+/CD44v9+的患者并没有比单独表达CD44v6+和CD44v9+更低的生存时间。4.单因素生存分析发现淋巴结转移，血管侵犯，肝转移，TNM分期，单独和联合表达CD44v6+，CD44v9+和CD44s-均是影响胰腺癌生存的危险因素。进而，多因素生存分析发现只有CD44v6+/CD44s-和淋巴结转移是影响胰腺癌生存的独立危险因素。四、研究结论在所有的CD44亚型中CD44v6+，CD44v9+和CD44s-和胰腺癌的转移和预后相关，在胰腺癌中，不同的CD44v和CD44s的表达模式可能是预测胰腺癌预后有用的指标。