硝基呋喃类药物及其代谢物具有强毒性和致癌致畸性,残留于动物源性食品中会对人体健康产生巨大危害。因此,许多国家已将硝基呋喃类药物列为禁用药物,并规定在动物源性食品中硝基呋喃类药物及其代谢物不得检出。但由于其成本低廉,药效明显,仍有不法分子为牟取暴利继续使用。呋喃妥因是硝基呋喃类药物之一,目前,针对呋喃妥因代谢物(AHD)残留的检测多采用仪器检测分析法,这些方法虽然准确、灵敏,但需要昂贵的设备和专业技术人员操作,而且耗时长,成本高,不适用于大量样品的快速筛查。因此,建立一种便捷、快速、灵敏的AHD残留检测方法,对于迅速控制食品安全风险,保障人民群众饮食健康安全具有重要意义。本实验建立了检测AHD残留的酶免疫分析法,即化学发光酶免疫分析法(CLEIA)和酶联免疫分析法(ELISA)。首先,采用对醛基苯甲酸将AHD衍生化为半抗原CPAHD,并在此基础上采用活化酯法将CPAHD与卵清蛋白(OVA)偶联合成包被原；分别用活化酯法和混合酸酐法将CPAHD与辣根过氧化物酶(HRP)偶联合成了两种酶标抗原。通过直接竞争ELISA法,优选出采用活化酯法制备的酶标抗原灵敏度更高,更加符合CLEIA法和ELISA法的实验要求。其次,建立了AHD的间接竞争CLEIA法和直接竞争CLEIA法,并对化学发光液、包被条件、封闭液和竞争时间等参数进行了优化,间接法中优选了包被原与抗体的最适稀释度、直接法中优选了抗体与酶标抗原的最适稀释度。结果表明,间接竞争CLEIA法和直接竞争CLEIA法的IC50分别为0.753ng/mL和0.539ng/mL;特异性良好,除对呋喃妥因原药存在一定交叉反应外,对其他结构类似物及衍生化试剂均无交叉反应；准确性和精密度良好,对猪肉、鸡肉和鱼肉样品的添加回收率在84.9%-103.4%之间,批内和批间变异系数均小于12%；间接竞争CLEIA法对猪肉、鸡肉和鱼肉的最低检测限分别为0.020、0.021和0.019μg/kg,直接竞争CLEIA法对猪肉、鸡肉和鱼肉的最低检测限分别为0.013、0.013和0.012μg/kg。第三,建立了AHD的间接竞争ELISA法和直接竞争ELISA法,并对显色时间进行优化,其余优化条件项目与CLEIA法相同。结果表明,间接竞争ELISA法和直接竞争ELISA法的IC50分别为2.186ng/mL和1.291ng/mL;特异性良好,除对呋喃妥因原药存在一定交叉反应外,对其他结构类似物及衍生化试剂均无交叉反应；准确性和精密度良好,对猪肉、鸡肉和鱼肉样品的添加回收率在82.6%～104.7%之间,批内和批间变异系数均小于13%；间接竞争CLEIA法对猪肉、鸡肉和鱼肉的最低检测限分别为0.219、0.214和0.208μg/kg,直接竞争CLEIA法对猪肉、鸡肉和鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113和0.109μg/kg.实验结果表明,本实验建立的AHD酶免疫分析法,其灵敏度、准确性、精密度及最低检测限均能满足实际样品检测的需求。其中CLEIA法的灵敏度和最低检测限均优于ELISA法,直接竞争CLEIA法又比间接竞争CLEIA法具有更高的灵敏度和更低的检测限,可为一线食品安全监管人员检测AHD残留量提供一种准确、可靠、便捷的方法。结合前期建立的对食品小样本的灰评估方法,可以从点和面等不同维度较为全面地判别食品风险程度,对有效和积极防控食品安全重大隐患具有较强的实际应用价值。