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本文是对于本研究组之前克隆到的一个长1.3kb新的大鼠附睾特异EST进行进一步的研究。通过两轮5RACE得到320bp新序列,结合Northern杂交实验确定基因大小,获得1.6kb的全长基因,取名HongrES2。初步研究表明该基因没有典型的开放阅读框(ORF),是一个mRNA like的非编码RNA(m1RNA)。同时,序列分析表明,Hongres2是由两条不同的染色体(5号和19号)的转录子,经剪接而成。
Northern blot实验证明HongrES2 RNA的转录和表达具有附睾组织专一性。阉割动物模型实验的结果显示HongrES2 RNA的表达呈依赖雄激素的转录模式。原位杂交实验显示HongrES2 RNA信号主要停留在在附睾尾部区域的细胞核内.为了研究HongrES2作为一个非编码基因的基因功能,我们对该RNA的序列做了二级结构分析发现其3端200bp可以形成发夹结构。Northern Blot检测到其中一条臂能成为约23nt的小RNA,同时还能检测到其约100bp前体序列的杂交信号。从大鼠附睾的小RNA文库里,我们筛到了该序列的小RNA。总之,上述实验证据表明,1.6kb的HongrES2 RNA是个大鼠附睾特异表达的primary microRNA。
在进行序列分析的时候,我们发现,HongrES2 RNA的3末端源自chro19的200bp序列和大鼠附睾新基因CES7100%相同,而体外细胞实验证明HongrES2的过表达能下调CES7的蛋白表达。所以,附睾特异的胆固醇脂酶CES7是HongrES2组织特异的靶基因。
从附睾炎病人身上分离所得的病原菌经培养后,注射到大鼠附睾尾部引起炎症,导致HongrES2 RNA从一级前体加工成成熟体的过程加速,成熟体小RNA的表达增加。以上研究结果表明附睾特异的非编码RNAHongrE2,作为一个编码蛋白基因的调控分子,其自身的转录合成以及后续的加工成熟会受到不同生理状态的调节影响。