基于生物碱的博落回蜂产品鉴别及其对细胞毒性的影响

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博落回系罂粟科植物,广泛分布于我国东、南各省,其主要有效成分为异喹啉类生物碱。这些生物碱具有显著的生理活性和毒性作用,过量摄入可能会对人体造成不适、引发严重的疾病甚至死亡。蜜蜂通过采集花蜜或花粉可将有毒生物碱成分转移至蜂产品中,从而给消费者的健康带来潜在的危险。目前我国对博落回蜂产品的研究尚不够充分,也未见相关文献报道博落回蜂蜜和花粉的鉴别及毒性评价研究。本研究基于电镜扫描确认博落回蜂花粉的形态,依据蜂蜜国家标准测定方法分析了博落回蜂蜜的理化性质,根据博落回在生物碱的特征提出基于特征生物碱来鉴别博落回蜂产品,通过优化提取方法和分析条件建立了博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的UHPLC-MS/MS测定方法,根据生物碱的种类和含量筛选出合适的博落回蜂产品的生物碱标记物。另外,还初步考察了博落回蜂蜜和花粉中生物碱单体对细胞增殖和活力的影响,旨在为蜂产品质量评价和风险评估标准的制订提供依据。  本研究主要分为以下四部分:  第一部分:优化了博落回蜂花粉形态分析的前处理方法,通过电镜扫描获得了博落回蜂花粉的花粉形态。依据国标蜂蜜的方法测定了博落回蜂蜜的基本理化指标,包括花粉形态、水分、pH、糖(葡萄糖、果糖、蔗糖)含量、蛋白质含量、淀粉酶活性及总酚。结果表明,花粉形态验证了蜂蜜和花粉样本的来源及真实性,其余各项指标基本符合国家标准。  第二部分:建立了QuEChERS-UHPLC-MS/MS测定博落回蜂蜜和花粉中异喹啉类生物碱的分析方法。在0.01-10μg/L浓度范围内,7种生物碱的线性相关系数均大于0.99,基质匹配校准法很好地扣除了基质效应,蜂蜜和花粉在0.001,0.01,0.1mg/kg三个添加水平下的基质平均回收率在76.0-98.7%之间,精密度在2.1-7.1%之间。蜂蜜和花粉的方法检出限分别为0.04-0.2μg/kg、1.0-6.1μg/kg,定量限分别为0.1-0.5μg/kg、2.6-13.0μg/kg。该方法简单快速,准确可靠,选择性好,适用于博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的定性和定量分析。  第三部分:基于建立的QuEChERS-UHPLC-MS/MS方法测定了主要博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的种类和含量。结果显示,博落回花粉中有7种生物碱,蜂蜜中主要有4种生物碱,而蜂王浆中未检出生物碱。这几种生物碱均不存在普通蜂蜜(油菜,洋槐,枣花,荆条等130个)和花粉(油菜、荷花等30个)样品中,其中原阿片碱和别隐品碱是博落回蜂蜜和花粉中最主要的生物碱,因此,我们可以将这两个生物碱作为潜在的标志物鉴别博落回蜂产品。  第四部分:选用小鼠皮下成纤维L929细胞及正常人L02肝细胞为对象,考察了7种异喹啉类生物碱对这两种细胞的增殖与活力的影响。结果表明在一定浓度范围内,这几种生物碱均表现出不同程度的细胞增殖抑制作用。生物碱刺激L929细胞的影响比L02细胞严重,其中血根碱和白屈菜赤碱的细胞毒性最明显,在浓度分别为1μmol/L和4μmol/L时L929细胞的存活率为60%左右,最大浓度20μmol/L时L02细胞几乎没有细胞活力。通过本研究的生物碱细胞毒性数据结合博落回蜂产品中生物碱的含量结果分析可知,在日常摄入最大量蜂蜜和花粉的情况下,博落回花粉可能会对人体健康带来潜在的风险,而博落回蜂蜜对人体健康风险较小。
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