论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是严重危害人类健康的公共卫生问题。其中母婴宫内传播已成为乙肝病毒感染最主要的途径。阻断乙刑肝炎病毒母婴传播成为防止新发乙肝病人的主要措施。既往的很多研究表明,母体e搞原阳性和HBV DNA高滴度是导致胎儿宫内感染的主要原因。而近年来的临床观察发现,在e抗原阴性的情况下也易发生乙肝病毒宫内感染。HBV前C区1896 G→A变异可导致HBeAg阴性的HBV感染。该现象提示除e抗原阳性和HBV DNA高载量等因素之外,应有HBV前C区1896变异所致e抗原阴性的孕妇发生的HBV宫内感染。胎盘感染是引起乙肝病毒宫内传播的高危因素,通过检测胎盘T淋巴细胞、Hofbauer细胞及IL2水平,可反映受HBV感染后胎盘细胞免疫的情况。本课题对HBV前C区1896 G→A变异与乙肝病毒宫内传播的相关性进行研究,并对HBV前C区1896变异经胎盘途径传播的机制进行了探讨。第1部分乙肝病毒前C区1896G→A变异与HBV宫内感染的关系研究目的：探讨孕妇HBV前C区18966→A变异与宫内感染的关系。方法：将携带乙肝病毒的孕妇及其新生儿294对分为两组(HBV前C区1896G→A变异组149对,非变异组145对),采用荧光PCR法检测孕妇静脉血HBV1896位点变异；应用酶联免疫吸附法(ELISA)和病毒核酸扩增法(免疫荧光定量PCR方法)对孕妇静脉血和新生儿外周血进行HBV血清学标志物和HBV DNA载量的检测。结果：149例HBV1896G→A变异组孕妇外周血检测HBV DNA载量1g值均值为数(6.781±0.894),非变异组HBV DNA载量1g值的均值为数(2.706±0.789),HBV DNA载量1g值均值检验有显著性差异(t=10.7991,p<0.01)。HBV1896G→A变异组HBeAg阴性孕妇宫内感染率15.71%(11/70),而同组HBeAg阳性者13例发生宫内感染率为16.46%(13/79),两者比较无显著差异(X2=0.02579,p>0.05)。变异组孕妇HBV1896G→A变异组孕妇149例,HBV1896G→A非变异组孕妇145例,其新生儿外周血检测HBsAg阳性或(和)HBV DNA阳性分别23例和11例。变异组孕妇发生宫内感染率宫内感染率为15.44%(23/149),明显高于非变异组的宫内感染率7.59%(11/145),差异有显著性(X2=4.4279,p<0.05)。结论：在携带乙型肝炎病毒的孕妇中,前C区变异18966→A阳性者比无前C区变异者伴有更高水平的HBV DNA。HBV变异导致的HBeAg低表达并未降低宫内感染率。乙肝病毒前C区18966→A变异增加了HBV宫内感染率。第2部分：乙肝病毒前C区1896G→A变异孕妇的胎盘细胞免疫研究目的：探讨发生前C区1896G→A变异的HBV经胎盘途径传播机制。方法：将研究对象61名携带乙肝病毒孕妇分为2组：(1)32名HBV前C区18966→A变异的孕妇为研究组(又称为变异组)。(2)29名HBV前C区18966→A非变异的孕妇为对照组(又称为非变异组)。收集其胎盘组织标本,用免疫组织化学法分别检测胎盘组织中细胞囚子白介素2(IL2)的表达以及T淋巴细胞和Hofbauer细胞(每张切片随机选取18个放大400倍视野作细胞计数,然后取平均值)。结果：HBV前C区18966→A变异的胎盘中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞数(Hofbauer细胞)显著增加。研究组和对照组CD3阳性的T淋巴细胞平均计数分别为：39.2±1.185和9.6±2.503。两组CD68阳性的巨噬细胞相应的平均计数：研究组22.7±4.5227,对照组9.5±2.173,方差分析结果显示两项指标研究组与对照组比较均有显著差异,分别为(t=19.1958,p<0.01),(t=8.31889,p<0.01)。胎盘组织中的白介素2(IL2)阳性率变异组与非变异组分别为78.12%和13.79%。变异组IL2的表达增强,两组比较有统计学意义(X2=25.2454,p<0.01)。结论：乙肝病毒发生前C区1896G→A变异后,胎盘感染HBV机率增加。出现乙肝病毒发生前C区1896G→A变异后,T淋巴细胞和Hofbauer细胞介导的细胞免疫可能有所增强。