刺孢小克银汉霉γ-亚麻酸发酵工艺研究

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多不饱和脂肪酸(PUFAs)对人体一系列生理活动的调节具有至关重要的作用,γ-亚麻酸(GLA)是PUFAs的一种,是人体必需脂肪酸之一。利用真菌在处理淀粉废水的同时获取GLA是废水资源化途径之一。本文利用刺孢小克银汉霉(Cunninghamella echinulata FR)对模拟土豆淀粉废水进行GLA发酵工艺研究,可为探索以废水作为廉价培养基,低成本获取γ亚麻酸提供研究基础及工艺。通过对液体种培养条件的优化,获得种子液培养的最佳条件:菌种以三角瓶固体培养基活化6d,利用孢子悬液方式接入装液量为100mL(250mL摇瓶)PDY中,使孢子终浓度为108个/mL,加入6颗4-5mm的玻璃珠,在28℃、转速150r/min的条件下培养48h,最终获得了最佳菌球直径为0.5-2mm的致密菌丝球种子液。通过摇瓶发酵条件的优化研究,明确了摇瓶发酵过程中最佳的溶氧条件为500mL摇瓶中装液量为150mL以150r/min的转速进行培养;同时利用响应面优化分别对培养基组分中C/N和补料方法进行了优化,最佳条件是:将(NH4)2SO4与黄豆粉以氮源质量比3:7混合为氮源,总氮元素添加量为0.238%,培养初始葡萄糖浓度为7.128%,在第4.2 d时补加浓度为4.67%的葡萄糖溶液进行发酵。最终发酵的生物量、油产量及GLA产量分别达到了35.6g/L、11.81g/L、10.36%,并建立了摇瓶发酵动力学模型。在生物反应器培养过程中,对发酵过程的调控参数进行了优化。最优发酵温度及pH控制工艺为:发酵过程中的前4d保持菌株的最适生长温度28℃和最适生长pH 6.0,发酵过程中的后3d控制为最适积累油脂、合成GLA的温度18℃及最适pH 5.0;最优发酵罐转速控制工艺为:第1d和3d停止搅拌,第2d及第4d至第7d进行搅拌,搅拌转速为200 r/min,发酵期间通气量保持400L/h;最优补料工艺为:发酵第2d起每天补加葡萄糖1%,补加总浓度为5%。在最优发酵控制工艺下,生物量、产油量和GLA产量分别达到了38 g/L、13.46 g/L、10.12%。
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