论文部分内容阅读
第一部分:绪论介绍了共振散射技术发展历史、分析应用以及发展前景。综述了金纳米微粒的制备、表征、组装和生物标记中的应用以及补体C3的分析进展。第二部分:免疫共振散射光谱分析法简便快速测定补体C3利用补体C3与羊抗人C3抗体在pH 6.0的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液和聚乙二醇(PEG)存在下发生特异性反应生成免疫抗体抗原复合物,导致体系在340nm处的共振散射峰增强,建立了一个测定补体C3的免疫共振散射光谱法。C3的浓度在0.167-3.33μg·mL-1的范围内,与340nm处的共振散射强度呈线性,回归方程为I340nm=0.1603C+12.42,R2=0.9926,检出限为0.058μg·mL-1。该方法具有试样用量少、简单快速的特点,用于定量分析人血清中的补体C3,得到的结果较为满意。第三部分:快速灵敏的免疫纳米金共振散射光谱探针测定补体C3采用改良柠檬酸钠还原法制备了粒径约为10.0nm的胶体金颗粒,在pH 7.5条件下制备了金标记羊抗人C3抗体共振散射光谱探针。在pH值为5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液中及PEG存在下,金标记上羊抗人C3抗体与补体C3发生特异性结合,形成胶体金免疫复合物,导致体系在580nm处的共振散射强度急剧增强。补体C3浓度在0.00833-0.200μg·mL-1范围内与共振散射强度的增大值呈良好线性关系,检出限为0.0028μg·mL-1。此法用于人血清测定补体C3具有简便、快速等特点。获得较满意的结果。第四部分:纳米金标免疫抗体催化增强反应的共振散射光谱研究及其超痕量检测补体C3在pH 7.5条件下用金纳米颗粒标记羊抗人补体C3获得C3共振散射光谱探针。当pH值为5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液及PEG存在条件下,金标记羊抗人补体C3与补体C3发生特异性结合生成胶体金免疫复合物。以12000rpm速度离心分离获得未反应的金标抗上层溶液。以它作晶种,在pH 2.97柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液-53.33μg·mL-1 HAuCl4-74.13μg·mL-1NH2OH·HCl溶液中及37℃条件下反应3分钟内,免疫金纳米微粒粒径表面积迅速增大,大大提高了585nm处金纳米微粒的共振散射强度I585nm。结果表明,随着C3浓度增大,离心上层溶液中金标抗浓度降低,I585nm线性降低。其降低值△I585nm与补体C3浓度在5.0-160.0pg·mL-1范围内呈良好线性关系,检出限为1.52pg·mL-1。本法具有灵敏、快速和高的特异性,用于定量分析人血清补体C3,结果满意。