背景食管癌是全世界范围内常见的十大恶性肿瘤之一,在全球肿瘤致死性病因中排名第六位,全世界每年约30万人死于食管癌,亚洲、南非和东非是食管癌的高发区,每年因食管癌死亡人数约占消化系统恶性肿瘤死亡总数的1／4,严重危害人类健康。虽然食管癌在北美和很多西欧国家发病率低,但在近30年里,这些国家食管腺癌发病率不断上升并且死亡率较高。目前手术切除是最重要的治疗手段,但单纯手术治疗效果不理想,早期转移及术后转移是影响患者预后的主要原因,术后五年的生存率只有10-20%。因此,控制肿瘤转移在控制食管癌患者疾病进程及改善预后十分重要,食管癌病变过程是一个多基因变异累积、多种分子参与的复杂过程,其详细机制仍不十分清楚。MicroRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为20-25个核苷酸的非编码单链RNA分子,由内源基因编码。参与动植物基因转录后的表达调控,最近有研究表明,miRNA在细胞中具有很重要的调控作用,每一个miRNA都可具有多个靶基因,而且几个miRNA可以共同调节同一个基因,这种调节网络不但能够用一个miRNA来调控多个基因的表达,而且也能够通过几个miRNA共同作用来准确的调控某一个基因表达。据研究表明,miRNA调控着人类约1/3的基因,有越来越多的证据支持miRNA在肿瘤转移中发挥重要作用,有些miRNA在细胞内表达能够抑制肿瘤细胞的转移,而有些在细胞内表达则能够促进肿瘤细胞转移,miRNAs作为一类高度保守的非编码RNA,在细胞增殖、分化和凋亡过程中均起到重要作用。已有的研究表明miR-9在肿瘤中的表达取决于组织类型的不同,在原发性脑肿瘤中, miR-9水平是升高的,并且在神经细胞癌变中起重要作用, miR-9在宫颈癌中也是高表达的,提示它对肿瘤的发生和进展起重要作用。但是,miR-9在许多肿瘤组织中的表达是下调的,包含胰腺癌、结肠癌和卵巢癌,并且在结肠癌、乳腺癌的恶性进展过程中发挥重要作用。已有实验证实,miR-9在胃.癌中明显低表达,然而,其在食管癌中是否具有抑制肿瘤细胞侵袭与转移作用,以及在食管癌中发挥的生物作用机制仍不明确。本实验目的是研究miR-9在食管癌中的表达情况及miR-9在食管癌中的作用。目的miR-9在食管鳞癌细胞系KYSE30, KYSE70, KYSE140, KYSE150中的表达情况及miR-9在食管鳞癌中的作用材料与方法通过Real-time RT-PCR实验方法分析检测4株食管鳞癌细胞系(KYSE30, KYSE70, KYSE140, KYSE150)及人食管上皮细B (HEEpiC) miR-9表达水平。将miR-9前体分子(Pre-miR-9)分别转染KYSE30细胞系,改变miR-9在这株细胞系中的表达水平,进行以下功能试验。通过CCK8法检测细胞生长情况,3天后绘制出生长曲线,分析miR-9对细胞增殖有无影响。用PI染色法,采用流式细胞仪分析其在细胞周期中的调控作用,使用AnnexinV-FITC/PI双染色法通过流式细胞仪检测细胞凋亡。用Transwell法检测细胞的迁移能力结果通过Real-time RT-PCR实验方法分析检测出4株食管鳞癌细胞系中miR-9的表达水平均降低,并且不同细胞内表达水平存在差异。在miR-9的功能研究中,转染Pre-miR-9,使Pre-miR-9在KYSE30细胞系中过表达,检测细胞生长曲线,与对照相比,过表达的细胞生长速度明显降低,低表达的细胞生长速度增快,说明miR-9在细胞增殖过程中有抑制作用。在KYSE30中过表达miR-9,用流式细胞仪检测细胞周期,发现miR-9过表达组与空白对照组比较,G1期的比例明显增多。AnnexinV—FI TC/PI双染法通过流式细胞仪检测细胞的凋亡,三组细胞凋亡百分比无明显差异。用Transwell法检测细胞的迁移能力发现,过表达miR-9可以抑制细胞迁移能力。结论miR-9在食管鳞癌细胞系中表达降低,过表达miR-9能通过将肿瘤细胞阻滞于G1期,抑制食管鳞癌细胞增殖,抑制肿瘤细胞迁移发挥其抑癌作用。