目的分析神经危重症患者感染的肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,KP)基因学特征及其环境定植传播状态,分析KP携带的耐药基因与耐药表型的关系,指导临床抗菌药物的应用和神经重症加强治疗病房(Neurological intensive care unit,NICU)环境的消毒灭菌,从而降低NICU的KP感染率。方法2015年1月~10月,记录所有入住NICU患者一般情况及临床治疗情况,对感染患者及时采集各种相应感染部位的标本,并在感染发生24小时之内对其所居住的病房环境(包括空气、枕头、棉被、床头柜表面)进行采样,并检测标本的病原学及药物敏感性,同时保留KP。常规监测NICU大小房间(大房间6张床、小房间2张床)环境的微生物学分布特点,保留KP。采用煮沸法提取KP的DNA,利用多聚酶链反应(PCR)扩增KP耐药基因,对扩增的目的基因用琼脂糖凝胶电泳,若出现与目的基因片段大小相同的条带即判为阳性。利用脉冲场凝胶电泳相关技术(PFGE)检测患者感染及环境中的KP菌株之间的相似性。结果2015年1月~10月NICU住院总人数为221例,感染患者共154例,其中医院感染41例,感染率18.55%,148例进行了病原学检查,送检率为96.10%;检出非重复病原菌共99株,其中KP 25株,铜绿假单胞杆菌21株,大肠埃希杆菌11株。感染环境监测中,于大房间的空气及床头柜表面各发现1株KP(记为A’、T’),于小房间的空气中发现1株KP(记为A1);常规环境监测中未检出KP。非重复KP 25株,均分离于患者的痰标本中,所有的菌株对氨苄西林及哌拉西林完全耐药,对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶完全敏感,对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南、头孢替坦、阿米卡星等抗菌药物均很敏感。从环境中检出的3株KP的耐药率较高。25株患者感染KP检出耐药基因:β-内酰胺类:SHV 24株,TEM及CTX-M-9各2株,KPC、CTX-M-1、CTX-M-2及IMP各1株;氨基糖苷类:rmt B及npm A各1株;喹诺酮类:qnr B 4株,qnr A 3株,qnr S 2株,acc-(6’)-Ib-cr 1株。3株环境中KP检出耐药基因:SHV 2株,CTX-M-9、IMP、rmt B及acc(6’)-ib-cr各1株。对29株KP(同时包含一名KP感染患者咽拭子中的菌株)进行酶切后电泳,有27株成功分型,按照相似度100%视为相同PFGE型别,将27株菌分为了23种型别。其中,1521Y和1521T为同一型(同一名患者的咽拭子与痰中的2株KP),1520和1525为同一型,A’和T’为同一型,且与1503菌株相似度在86.7%,1501和1513为同一型。结论KP是NICU患者感染的最主要致病菌,患者年龄、住院时间、抗菌药物的使用以及侵入性操作治疗是患者发生感染,病情加重的重要因素。KP携带耐药基因以SHV阳性率最高,可能是KP对氨苄西林及哌拉西林耐药的主要基因型,KP多药耐药的菌株多携带多种耐药基因,是其产生多药耐药的基因学基础。KP对氨苄西林及哌拉西林完全耐药,应避免临床应用,可选择磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南、环丙沙星、头孢替坦、阿米卡星等抗菌药物;产ESBLs菌株耐药性明显高于非产ESBLs菌株,应加强产ESBLs菌株的检测。KP可以在患者与患者之间传播,也可以定植在环境中,引起患者的感染,并可以长期定植,是引起暴发流行的潜在危险因素,应加强环境的监测,及时消毒灭菌,有效降低患者的感染率。