茄子单性结实基因连锁的SRAP分子标记

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茄子(Solanum melongena L.)起源于亚洲南部热带地区,古印度为其最早的驯化地,中国栽培茄子的历史悠久,是茄子的第二起源地,拥有丰富的茄子种质资源。茄子是喜温蔬菜,在设施栽培及春季露地早熟栽培条件下开花期常常由于低温弱光或缺乏授粉传媒而引起授粉受精不良,引起落花落果,降低效益。茄子单性结实品种由于不需要授粉就能形成果实,克服了授粉不良、落花落果等不利影响。因此,进行茄子单性结实基因的筛选和定位,对指导茄子单性结实品种的育种工作具有重要的现实意义。找到与单性结实紧密连锁的的分子标记,就可以在幼苗期进行单性结实鉴定以及选育,从而缩短了育种进程,这对茄子单性结实辅助育种具有重要作用。本研究利用SRAP分子标记对茄子的单性结实基因进行连锁分析。以茄子的单性结实母本(D-6)、非单性结实父本(896)自交系和F2代群体为材料,用BSA法对其进行构建极端基因池即单性结实池和非单性结实池,得到的主要结论如下:1、运用了改良CTAB法提取茄子叶片基因组DNA,结果显示:改良CTAB法提取的基因组DNA片段较好,DNA浓度也比较高,DNA质量检测结果也在标准值范围内,完全适用于SRAP的研究分析。2、以茄子基因组DNA为模板,通过对Mg2+、dNTPs、引物浓度、模板DNA与Taq酶等几个影响因子进行组合检测,得到了优化的茄子SRAP-PCR反应体系(10μL)具体为:Mg2+浓度为2.0mmol/L、引物浓度为0.5mol/L、Taq DNA聚合酶浓度为0.75U. dNTPs浓度为0.20mmol/L、DNA模板浓度为50ng/μL。进一步选取10对SRAP引物进行验证,结果显示:该体系能应用于SRAP对茄子全基因组的扩增。3、本实验采用21个正向引物和25个反向引物,对正向引物和反向引物进行两两配对得到525对引物组合,经扩增显带分析后筛选出24对在双亲表现多态性的引物。进一步扩增茄子单性结实、非单性结实两个极端基因池,经显带分析其中6对能在两个极端池出现稳定差异的引物组合,利用这6对引物组合对2个极端基因池的6株单性结实单株和6株非单性结实单株分别进行SRAP.PCR验证,结果发现,只有引物对me13em17与茄子单性结实表型存在连锁关系。4、用me13em17引物扩增出了一条在全部非单性结实株出现而在全部单性结实株上没出现的约为327bp的特异条带;me13em17引物还扩增出了一条约为275bp的特异条带,这条特异带在单性结实株上出现而在非单性结实株上没有出现。将出现在非单性结实株上的标记命名327me13gm17;将出现在单性结实株上的标记命名275me13em17,利用JoinMap4.0计算出这两个标记与单性结实位点的连锁距离为15.89cM和11.43cM。5、用me13em17引物对对F2群体200株进行单株检测,检测结果发现,在200株单株中非单性结实株143株,单性结实株57株,x2测验后可知F2代非单性结实株与单性结实株分离比例接近3:1,符合单基因分离比例,推测茄子D-6单性结实性的遗传由单隐性核基因控制。
其他文献
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