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本研究以2株国内分离的Aisa I型FMDV(分别命名为为Asia I/GD/L1/2000、AsiaI/GD/L2/98，简称为L1、L2)为研究目标，根据GenBank中注册的Aisa I型FMDV序列分别设计引物，采用RT-PCR技术成功扩增出两株Asia I型口蹄疫病毒的VP1、3ABC基因，将cDNA克隆至pMD20-T载体中进行序列测定。结果表明，获得2株分离株的VP1和3ABC基因核苷酸序列，其中VP1基因全长为633 bp,编码211个氨基酸；3ABC基因全长为13儿bp,编码437个氨基酸。2个毒株VP1基因核苷酸序列同源性为99.5％，推导氨基酸序列同源性为99.1％；3ABC基因核苷酸序列之间同源性为90.5％，推导氨基酸序列同源性为94.5％；2个毒株与我国江苏、北京和印度地区分离的毒株同源性较高。
将2株Aisa I型FMDV的VP1和3AB基因亚克隆至大肠杆菌表达载体pBCX中，两毒株的VP1和3AB基因成功获得了表达，获得四种融合蛋白mysB-VP1-L1、mysB-VP1-L2和mysB-3AB-L1、mysB-3AB-L2，其相对分子量分别为58 Ku、58 Ku、59 Ku、59 Ku。用Western-blot对两种融合蛋白做进一步的检测，在预测的位置都能检测到特异性条带，表明两种融合蛋白mysB-VPl-L1和mysB-3AB-L1能与抗Aisa I型FMDV抗体发生特异性反应。用50％的Ni-NTA对所表达的两种融合蛋白通过亲和层析的方法进行纯化，结果表明，两种融合蛋白纯化成功，纯化后融合蛋白mysB-VPl-L1和mysB-3AB-L1浓度分别为2.28 mg/mL、3.08 mg/mL。
将纯化的mysB-VPl-L1作为诊断抗原，通过对抗原抗体最适反应浓度、包被液的选择、交叉性试验和重复性实验等条件的摸索，初步建立了一套EL,ISA检测方法，用该方法对34份牛血清进行检测，结果表明，以mysB-VP1-L1融合蛋白作为诊断抗原检测FMDV抗体，具有敏感、特异、安全的优点。
将纯化的mysB-3AB-L1融合蛋白作为诊断抗原，建立了区分FMD野毒感染的动物群体和疫苗免疫的动物的ELISA方法，mysB-3AB-L1抗原最佳包被浓度为0.308ug/mL，抗体最佳稀释倍数为40倍。本试验建立的DIVA．EL,ISA方法有良好的性能，不受不同血清型FMDV感染的限制。