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研究背景增生性瘢痕（Hypertrophic scars,HS）是一类特发于人类皮肤的纤维化病变,皮肤深度创伤后极易发生,是困扰组织修复领域的难题。目前临床常采用手术切除、激光治疗、类固醇药物注射、硅凝胶治疗等方法,虽取得一定的疗效,但仍存在各自的不足,因此至今尚缺乏增生性瘢痕的理想治疗方法。现代医学认为HS的发生主要与真皮层成纤维细胞（HSF）异常增殖和细胞外基质（ECM）过度沉积有关,中医学称HS为锯痕证,认为HS由血行瘀阻所致,多采用活血化瘀、软坚散痈治则。丹参是临床常用活血化瘀中药,丹参酮ⅡA（Tanshinone IIA,TSA）是其主要脂溶性成分。研究表明TSA可剂量依赖性降低HS中异常活化的HSF增殖指数,阻断其从G1进入S期,使细胞停滞于G1期,进一步诱导其凋亡,同时激活胶原蛋白酶活性,加速ECM的重吸收和降解。本课题拟将TSA制备自溶微针贴剂,促进药物透皮转运,增强药物真皮滞留发挥抑瘢作用,为临床有效防治HS提供一种可行方案。目的在丹参酮ⅡA固体分散体（TSA-PVP SD）的基础上制备丹参酮ⅡA自溶性微针（TSA-MN）,进行体外释放、透皮性能、皮肤刺激性等评价,考察对HSF细胞增殖、迁移修复能力和TGF-β1水平、Smad7蛋白表达的影响,为TSA-MN抑制瘢痕增生提供科学依据。方法（1）TSA-PVP SD的的制备与表征。利用固体分散技术制备TSA-PVP SD,建立TSA的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法,采用显微观察、溶解度实验及体外溶出度测定对TSA-PVP SD进行物相鉴别,采用X射线粉末衍射（XRD）、差示扫描量热（DSC）及红外光谱研究（FTIR）对其进行结构鉴定。（2）TSA-MN的制备工艺研究。优选微针基质、注模及固化方式,采用阴模浇注法制备TSA-MN,体外透皮吸收法测定其24h真皮滞留量,以真皮滞留量为评价指标,采用Box-Behnken效应面法优化微针的处方工艺。（3）TSA-MN的质量评价。考察TSA-MN形貌学、pH值、载药量及吸湿性等基本物理化学性质;以透析膜为介质动态考察TSA-MN的药物体外释放能力;以离体乳猪腹部皮肤为介质考察TSA-MN的体外经皮吸收释药能力;以Coumarin-6（香豆素-6）作荧光探针考察其皮肤转运特性;考察TSA-MN的皮肤刺激性,观察皮肤状态综合评分,取下给药部位皮肤,进行组织切片及HE染色,评价该透皮制剂的皮肤用药安全性。（4）TSA-MN对HSF生物学特性的影响。建立HSF体外培养方法;采用CCK8法筛选TSA对HSF的最佳作用时间及浓度;采用CCK8法考察微针对TGF-β1诱导的HSF细胞增殖的影响;采用体外伤口愈合实验考察微针对HSF细胞迁移修复能力的影响;采用Western blot法检测TSA-MN对HSF的TGF-β1、Smad 7蛋白的表达水平。结果（1）TSA-PVP SD能显著增强TSA溶解性能及体外溶出度,80min体外累积溶出率即达到90%以上;物相鉴别结果显示TSA以非结晶状态均匀分散于PVP中形成固体分散体,TSA与PVP间存在相互作用。可将TSA-PVP SD用于课题下一步微针制备实验。（2）TSA-MN优选工艺参数为:称取TSA-PVP SD,硫酸软骨素（CS）（2:1,w/w）加入0.5倍量纯化水（w/w）搅拌均匀并静置至溶胀完全,浇注于0.5mm聚四氟乙烯微孔阵列模具上,超声震荡（功率270W,15min）使溶液充分填充于微孔中,得针尖载药层,取出模具置干燥器内干燥12h。取基质溶液（PVP与CS按1:1混合并充分溶胀）浇注于载药层上方,抽真空使溶液平铺均匀,与载药层之间无气泡,得微针背衬层,将微针模具继续放置于干燥器干燥12h,取出脱模即得TSA-MN贴剂。根据最优工艺制备3批TSA自溶性微针样品,测得真皮滞留量为（30.4813±0.7181）μg·cm-2,结果表明制备工艺稳定可靠。（3）TSA-MN阵列每根针呈圆锥状,状态完好无断针,pH值在6.1-7.8之间,含药量为（10.06±0.15）mg/片,在高湿度的环境下易吸湿,24h吸湿率可达23.2%±0.6%,日常应将其保存于干燥器内;24 h时TSA-MN内TSA的累积释药率为55.68%,相比于原料药表现出较明显的缓释作用,符合一级动力学方程;24hTSA在TSA-MN中的累积药物透皮量最符合Higuchi方程模型,TSA-MN的透皮释放过程遵循溶蚀与扩散并存,利用香豆素-6发现TSA-MN在给药初始阶段即可释放药物到达病灶部位真皮层,并滞留于真皮层持续发挥药效,左右同位对比法验证TSA-MN对皮肤几乎无刺激性。（4）高、中、低浓度的TSA-MN对HSF均呈现一定的增殖抑制作用,且在一定范围内该作用具有时间及剂量依赖性,同时TSA-MN还能大幅度抑制细胞的迁移能力;Western blot实验显示TSA-MN会显著降低HSF的TGF-β1分泌量,同时增高Smad7的表达。结论固体分散技术能显著提高TSA的溶解度和溶出性能,PVP是增强TSA溶出度的良好载体,将TSA-PVP SD制备为自溶性微针,通过工艺优化后具有稳定良好的真皮滞留效应。本课题制备的TSA-MN质量良好,几乎无皮肤刺激性,体外释放及透皮性能均优于TSA原料药及普通剂型,具有显著的缓释作用及真皮滞留效应,抑制体外HSF的异常增殖和迁移能力作用明显,下调HSF的TGF-β1分泌量的同时增高Smad7表达水平,本次课题研究为后期将TSA-MN用于防治HS奠定了一定基础。