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山东省作为我国无花果(Ficus carica L)早期主要传入地和栽培地区之一,已有一百多年的栽培历史。特别是山东半岛一带,被称为我国无花果的沿海栽培中心。无花果虽然以无性繁殖为主,但是不同环境条件下的繁衍盈升,也会造成种内变异的多样性。而且,在很多地区都是庭院栽培,一些特殊的基因资源极有可能还未得到认识和利用。所以,很有必要对分布地区的无花果资源进行勘察和搜集保存,展开其多样性研究,尤其是对种质间的遗传差异从分子水平提供更为直接的证据,为进一步有效的开发利用奠定基础。
本研究利用RAPD(Random Amplification Polymorphism DNA)标记技术,对从山东省境内不同地区搜集到的无花果资源的多样性进行了评估。并对与叶形相关的分子标记进行了研究。另外,利用RAPD和SSR(Simple Sequence Repeat)两种分子标记技术构建部分无花果品种的DNA指纹图谱。
获得如下研究结果:
1.通过对8个市近20个乡镇(社区)的考察搜集,共搜集无花果资源66份,现田间保存资源31份共55株。
2.通过15个随机引物在58份资源上的RAPD分析,将所搜集的资源分为23个不同的基因型。随后又从120个随机引物中筛选出28个多态性高的引物,进一步对这23个基因型无花果进行RAPD多样性分析。共检测到309个清晰的位点,扩增片段范围在200bp~2500bp之间。其中多态性位点为236个,共有位点为73个,位点多态性比率为76.4%。利用NTSYS-pc分析软件分析了这23个基因型间的遗传相似系数。计算结果表明,绝大多数基因型之间遗传相似性较高,但其中之一与其它基因型资源的相似系数较低,可见其遗传背景比较特殊。利用UPGMA法构建了聚类树状图,当阈值为0.760时,可将23个基因型聚为五类。
3.在对无花果的多样性进行分析的过程中,鉴定出两个与基部非心形/心形叶形相连锁的标记:S20821640、S21041614。这两个标记经SCAR转化后,前者的多态性依然存在,可作为资源鉴定的有效手段。而后者在不同叶形间的多态性消失,对于这一问题,我们还会做进一步的研究。
4.利用RAPD和SSR两种分子标记技术,对收集到的11个无花果品种的DNA指纹进行了分析。经过28个随机引物的分析,最终区分出其中的三个品种,并将剩下的8个品种分为三组。其中,引物S1259的区分效率最高。通过8对SSR引物的扩增分析,多态性较高的引物MFC1和MFC4均能鉴定出其中的两个品种。将这两对引物扩增结果结合分析,得到了与RAPD分析相同的鉴定结果。这一研究结果,将为无花果的品种鉴定提供依据。