背景:艰难梭菌（Clostridium difficile,CD）是一种革兰阳性粗大杆菌,极度厌氧。人体和动物的肠道中定植得有一定数量的艰难梭菌菌群,其存在不会产生明显的病理症状;当肠道菌群平衡被打破时,艰难梭菌大量繁殖占据生态位,诱发肠道炎症,机体出现发热、腹痛、腹泻等症状。近十多年来,全球艰难梭菌感染（Clostridium difficile Infection,CDI）的发生率呈明显上升趋势,严重程度明显增加,不断有报道医院院内艰难梭菌感染的爆发。正常肠上皮细胞低表达TLRs,当有细菌入侵时,肠上皮细胞能够迅速识别各种各样的微生物并诱导相应的TLRs表达上调。目前有关TLR7介导的抗细菌感染和免疫调节机制的研究还不是很清楚。目的:本课题探究TLR7是否参与了艰难梭菌肠道感染的免疫调节过程,其作用是有害的还是保护性的?并尝试研究其具体作用机制,以期了解宿主与病原体之间的相互作用,为CDI的发病机制及机体抗细菌感染的免疫机制研究提供新的思路。方法:1.提取临床CDI患者和健康人群的外周血WBC总RNA,使用q PCR对TLR7 m RNA水平进行定量,与健康对照作比较,分析其临床意义,初步探讨其在CDI病理过程中的潜在作用。2.使用实时荧光定量PCR检测未感染WT小鼠和艰难梭菌感染小鼠结肠部位的TLR7不同时间点的表达水平;比较WT小鼠和TLR7-/-小鼠生存率、相对平均体重变化、肠道炎症及组织病理损伤、炎性因子的表达、结肠内容物细菌载量等方面的差异,明确TLR7在艰难梭菌感染中的作用。3.流式细胞术分析感染后小鼠结肠部位的白细胞募集及巨噬细胞凋亡情况,采用TUNEL法验证细胞凋亡情况;ELISA法检测结肠部位细胞因子的分泌水平;4.体外细胞实验,评价TLR7对巨噬细胞和中性粒细胞吞噬杀伤艰难梭菌的影响;检测巨噬细胞与艰难梭菌共培养后释放的活性氧量,初步探究TLR7在艰难梭菌肠道感染中的作用机制。结果:与健康人群相比,CDI患者的外周血WBC中的TLR7表达水平上调,然后构建CDI小鼠模型对此进行验证,其结果一致:艰难梭菌感染可导致小鼠TLR7的表达水平上调。发生艰难梭菌感染后,与WT小鼠比较,TLR7-/-小鼠的平均体重相对变化小、结肠内容物细菌载量负荷低、肠道损伤及病理评分低、白细胞浸润程度显著降低,生存率显著性升高;更重要的是,TLR7可以通过调节炎性细胞因子的表达,尤其是促进炎性因子TNF-α和IFN-γ的分泌、促进巨噬细胞释放更多的活性氧损伤肠道组织并扩大局部炎症反应;抑制了主要是巨噬细胞而不是中性粒细胞的吞噬活性,导致宿主对过度繁殖的艰难梭菌的清除能力下降。结论:TLR7在小鼠艰难梭菌感染中表现出显著的免疫损害作用,本课题工作为研究艰难梭菌感染与宿主的相互作用机制提供了新视角。