枇杷果肉质体相关基因克隆与表达及果色分子标记分析

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jingfei1415
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枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)属蔷薇科枇杷属植物,依据果肉的颜色分为黄肉和白肉两大类,而类胡萝卜素为枇杷的主要呈色色素。本研究以不同颜色的枇杷品种‘黄金块’(黄色)和‘白玉’(白色)不同成熟阶段的果肉为试材,分析了果实不同成熟阶段果肉的类胡萝卜素积累变化规律,观察和统计了果肉细胞质体进行了,同时对5个质体相关基因进行了克隆与表达分析,并对EjPAP7进行烟草原生质体亚细胞定位。此外,对获得的果肉颜色特异分子标记进行了验证。本研究旨在观察与统计不同颜色枇杷果肉质体的数量差异以及相关质体发育基因的差异表达对类胡萝卜素的差异积累提供依据,同时,对获得的特异分子标记进行验证。主要结果如下:(1)利用光学显微镜对果肉质体的观察和统计,可以看出在整个果实成熟中后期,‘黄金块’果肉细胞中有色体的数量远多于‘白玉’,且体积大。‘黄金块’果肉细胞中有色体数量随着果实成熟持续增加,至完全成熟时,有色体的数量达到最大值(56个/细胞);而‘白玉’果肉细胞中有色体数量随果实成熟不断减少且保持较低的水平。‘黄金块’和‘白玉’果肉的不同颜色的差异可能与有色体的形成和数量有关。(2)分离了枇杷果肉质体相关的5个基因,分别为EjPAP4、EjPAP7、Ej PAP13、EjFtsZ、EjMinD,5个基因均获得了CDS。对这些基因核苷酸和预测的氨基酸序列进行生物信息学分析,这5个基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与苹果、梨、桃、草莓等蔷薇科植物具有较高的同源性。(3)在‘黄金块’和‘白玉’中,5个质体相关基因的qRT-PCR结果显示,EjPAP7对有色体的形成和类胡萝卜素积累有显著影响,进一步研究发现EjPAP7定位在质体上,说明EjPAP7的差异表达可能导致不同品种的有色体数量差异,并最终造成类胡萝卜素的差异积累。EjPAP4、EjFtsZ和EjPAP13对枇杷果肉有色体的形成和类胡萝卜素的积累无显著影响。MinD在枇杷中的功能与其它物种中功能可能存在差异,需要进一步研究证实。(4)获得了果肉颜色特异分子标记,利用此标记在31个品种和24个杂交后代植株进行了验证,可以准确地将黄肉和白肉性状区分开来,验证结果表明:获得的果肉颜色特异分子标记可以作为区分黄、白肉性状特异分子标记。
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