第一部分阿帕替尼通过调节NF-κB信号通路下调MMP相关蛋白表达,从而抑制肝癌细胞的侵袭和转移【目的】我们旨在研究阿帕替尼在体外是否对人肝癌细胞的侵袭和转移具有抑制作用,并初步探讨其作用机制。【方法】（1）通过划痕试验和Transwell侵袭试验检测阿帕替尼对Hep G2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721这四种人肝癌细胞系迁移和侵袭的影响。（2）实时定量逆转录PCR（q RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）分析阿帕替尼处理后Hep G2和Hep3B这两种人肝癌细胞中金属基质蛋白（MMPs）家族、金属蛋白酶内源性组织抑制剂（TIMPs）家族基因以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。【结果】（1）阿帕替尼对Hep G2,Hep3B,Huh7和SMMC-7721这四种人肝癌细胞的迁移和侵袭均具有明显的抑制作用。（2）给予阿帕替尼处理后,Hep G2和Hep3B细胞系中MMP-1,-2,-3,-7,-9,-10,-11和-16的表达水平均明显下调。（3）相反,TIMP-3和TIMP-4的表达水平明显上调,TIMP-1和TIMP-2的表达水平未见明显变化。（4）除此之外,与对照组相比,阿帕替尼处理组细胞中IκBα和NF-κB p65的磷酸化水平明显降低。【结论】（1）阿帕替尼通过下调MMP家族基因中的MMP-1,-2,-3,-7,-9,-10,-11和-16表达来抑制人肝癌细胞的侵袭和迁移;（2）MMP相关基因表达的下调与其内源性组织抑制剂TIMP-1和TIMP-2的表达上调相关;（3）阿帕替尼的以上作用可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活来实现的。第二部分阿帕替尼通过调节NF-κB信号通路的激活下调MDR相关蛋白表达,从而逆转肝癌细胞对化疗药物的多药耐药性【目的】本研究旨在研究阿帕替尼是否对人肝癌细胞的多药耐药性具有逆转作用,并进一步探讨其相关作用机制。【方法】（1）首先通过逐渐增加培养基中化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）的浓度来建立Hep3B/5-Fu多药耐药细胞系。（2）细胞增殖实验（CCK-8）和流式细胞仪检测Hep3B/5-Fu细胞的多药耐药性以及阿帕替尼对其多药耐药性的逆转作用。（3）NF-κB p65特异性Si RNA转染Hep3B/5-Fu多药耐药细胞系,检测阿帕替尼处理后Hep3B/5-Fu中MDR和NF-κB信号通路相关基因表达的变化。（4）通过皮下注射Hep3B/5-Fu细胞建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,随机分为8组:对照组;阿帕替尼单药治疗组（50 mg/kg/天）;5-Fu单药治疗组（20mg/kg,每周给药两次）;奥沙利铂单药治疗组（6 mg/kg,每周给药两次）;阿帕替尼+5-Fu联合治疗组,阿帕替尼+奥沙利铂联合治疗组;5-Fu+奥沙利铂联合治疗组;阿帕替尼+5-Fu+奥沙利铂三药联合治疗组。每隔2天测量皮下移植瘤的体积。（5）末次给药24小时后处死裸鼠并剥离瘤体,通过实时荧光定量PCR,免疫组织化学染色和Western blot检测组织中多药耐药基因的表达水平。【结果】（1）成功建立Hep3B/5-Fu人肝癌细胞多药耐药系,Hep3B/5-Fu细胞显示出5-Fu的高耐药性（耐药指数46.14±10.26）,其对表柔比星和奥沙利铂的药物敏感均降低（耐药指数分别为4.31±0.90和6.61±0.78）。（2）阿帕替尼可逆转Hep3B/5-Fu细胞的耐药性并促进其凋亡,逆转指数为2.193.86,并随着阿帕替尼浓度的增加而增加。（3）转染NF-κB p65 si RNA后,Hep3B/5-Fu细胞中的耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显下调。（4）在转染的Hep3B/5-Fu多药耐药细胞中进行试验,发现与对照组相比,阿帕替尼治疗组细胞中P-gp,LRP,GST-pi以及p-IκBα,p-p65的表达显著降低。（5）动物实验结果显示,联合治疗（阿帕替尼加化疗药物）组的肿瘤生长速度显著低于单纯化疗药物治疗组,三药联合治疗组（阿帕替尼+5-Fu+奥沙利铂）在整个实验过程中显示出最慢的生长速度,并且治疗结束后瘤体的体积最小。（6）从剥离的移植瘤中提取蛋白和m RNA,再次验证了阿帕替尼可以抑制多药耐药相关基因MDR1,LRP,MRP2和GST-pi表达的作用。【结论】（1）阿帕替尼可以促进肝癌多药耐药细胞系Hep3B/-5Fu的凋亡并逆转其多药耐药性;（2）阿帕替尼通过下调多药耐药相关基因MDR1,LRP,MRP2和GST-pi的表达来逆转人肝癌细胞对化疗药物产生的多药耐药性;（3）该药对肝癌细胞MDR的逆转作用可以通过抑制NF-κB信号通路的激活来实现。