中药通管助孕方对输卵管阻塞性不孕症模型大鼠抗炎抗粘连作用机制研究

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目的:探讨中药通管助孕方对输卵管阻塞性不孕症大鼠的治疗效果,进一步了解中药通管助孕方疏通输卵管、促进受孕的作用机制与机理,为临床治疗输卵管阻塞性不孕症提供思路。方法:实验一体外抑菌实验:观察中药通管助孕方对输卵管阻塞性不孕症的常见致病菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的体外抑菌作用。采用试管二倍稀释法和琼脂平板打孔法测定中药通管助孕方对两种致病菌的最小抑菌浓度(MIC)和抑菌圈大小。以P<0.05为差异有统计学意义。实验二药效学实验:将75只SPF级10周龄SD雌性大鼠随机抽取10只为空白组,余65只采用混合菌(金葡菌+大肠杆菌)感染联合机械损伤法制造大鼠输卵管阻塞性不孕症模型,造模结束7天后,随机抽取5只大鼠进行模型评估,提示模型制备成功,将剩余60只按随机数字表法分为模型组、中药通管助孕方高、中、低剂量组、中成药组及西药组,其中空白组自由食水,模型组给予生理盐水灌胃,中药组给予中药通管助孕方高(36g/kg)、中(18g/kg)、低(9g/kg)剂量灌胃,中成药组给予蒲苓盆炎康颗粒(3g/kg)灌胃,西药组给予胎盘组织液(0.2m L/kg)肌注。观察大鼠一般情况变化、输卵管及盆腔大体情况改变、光镜下大鼠输卵管组织形态学变化,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠血清Janus激活激酶2(JAK2)、信号传导转录激活因子3(STAT3)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)、血小板衍生生长因子(PDGF)含量,免疫组化(IHC)法检测大鼠输卵管MMP9、PDGF蛋白表达水平,免疫印记法(WB)法检测大鼠输卵管MMP9蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测大鼠输卵管MMP9基因表达水平。数据采用SPSS26.0统计学软件进行分析处理。结果:实验一体外抑菌实验结果:中药通管助孕方对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有不同程度的抑制作用,MIC分别为125mg/m L、62.5mg/m L;抑菌圈分别为13.3mm、15.3mm。实验二药效学实验结果:1.大鼠一般情况:模型组大鼠行动迟缓,精神萎靡,被毛萎黄脏乱,出现脱毛现象,摄食量和饮水量均有减少,体重增长缓慢。各治疗组一般情况均有不同程度改善,中药通管助孕方高剂量组、中药通管助孕方中剂量组和西药组改善情况显著,结果趋于空白组。2.肉眼下大鼠输卵管及盆腔大体情况:模型组大鼠腹腔脏器形态不规整,子宫、输卵管、卵巢形态不规整,与周围组织粘连严重,输卵管明显肿胀、屈曲变形,硬度较大,弹性变差,与周围组织界限不清,管腔内积液、积脓,卵巢包膜内可见血肿。各给药组大鼠输卵管及盆腔大体情况均有不同程度改善,以中药通管助孕方高剂量组、中药通管助孕方中剂量组、西药组改善情况较好。3.光镜下大鼠输卵管组织形态学变化:模型组大鼠输卵管组织可见输卵管上皮细胞气球样变性,核居中,胞质空泡化,可见上皮细胞坏死,坏死细胞胞核固缩深染,胞质嗜酸性增强;肌层可见大面积的肌细胞气球样变性;可见炎性细胞浸润。各给药组输卵管组织形态均有不同程度改善,以中药通管助孕方高剂量组改善最为明显,其组织形态表现接近空白组。4.ELISA法检测大鼠血清JAK2、STAT3、MMP9、TIMP1、PDGF含量:中药通管助孕方高、中剂量组可显著降低大鼠血清中JAK2含量,差异均有统计学意义(P<0.05),高剂量组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);中药通管助孕方高、中、低剂量组可显著降低大鼠血清中STAT3、MMP9、TIMP1、PDGF含量,差异均有统计学意义(P<0.05);空白组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。5.IHC法检测大鼠输卵管MMP9、PDGF蛋白表达:中药通管助孕方高、中、低剂量组可显著降低大鼠输卵管组织中MMP9蛋白表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05),高剂量组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);中药通管助孕方高、中剂量组可显著降低大鼠输卵管组织中PDGF蛋白表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05),高剂量组与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。6.WB法检测大鼠输卵管MMP9蛋白表达水平:与模型组相比,中药通管助孕方高、中、低剂量组输卵管组织蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.05),空白组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。7.RT-PCR法检测大鼠输卵管MMP9基因表达水平,与模型组相比,中药通管助孕方高、中、低剂量组输卵管组织基因表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.中药通管助孕方对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有显著的体外抑制作用。2.混合菌感染联合机械损伤法可成功建立输卵管阻塞性不孕症大鼠模型。3.中药通管助孕方能抑制SOI大鼠的炎症反应,改善其盆腔粘连情况,降低血清中JAK2、STAT3、MMP9、PDGF、TIMP1含量,降低MMP9蛋白和基因表达水平,降低PDGF蛋白表达水平,其中以中药高剂量组疗效最显著,可有效发挥抗炎抗粘连作用,达到疏通输卵管、促进受孕的目的。
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