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乳腺癌是女性中发病率高，危害大的癌症之一，严重影响女性的身心健康。治疗乳腺癌的难点在于乳腺癌细胞具有很强的浸润与转移能力，这也是造成乳腺癌患者死亡率高的主要原因。因此对乳腺癌细胞浸润与转移机制的深入研究，对乳腺癌的预防以及临床治疗具有重要意义。骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）是一种磷酸化糖蛋白，它可以在胞内发挥作用，也可以分泌到细胞外发挥其生理功能。OPN可以参与到许多生理病理过程中，如炎症反应，免疫反应，细胞凋亡等。也可通过与细胞表面的特异性受体结合，介导肿瘤细胞的粘附、浸润与转移。但是，目前对OPN在肿瘤细胞中的作用机制还不清楚，需要更深入的研究。TLR（Toll-like receptors，Toll样受体）是一类在人体内广泛存在的并且高度保守的重要的模式识别受体，能够识别并结合病原相关分子模式（PAMP），在天然免疫反应中发挥重要的作用。近来研究表明，多种肿瘤细胞中也有TLR表达，并与肿瘤的发生、发展以及浸润与转移具有一定相关性，但目前对其作用机制尚不清楚。实验室前期研究发现，TLR2和OPN在两种乳腺癌细胞MCF-7（低转移乳腺癌细胞）和MDA-MB-231（高转移乳腺癌细胞）中存在差异性表达， MCF-7细胞中OPN和TLR2的表达均低于MDA-MB-231。还有研究表明TLR2和OPN分别在乳腺癌细胞的浸润转移中起促进作用，那么TLR2对乳腺癌细胞的浸润与转移作用是否与OPN有关系呢？二者又是通过什么机制相互作用的呢？为了解决以上疑问，本实验选取MDA-MB-231细胞（高转移的乳腺癌细胞）为研究对象，通过Pam3CSK4（TLR1-TLR2二聚体的激活剂）和LTA（TLR2的激活剂）激活TLR2信号通路，研究OPN的表达变化情况，进而研究TLR2与OPN在肿瘤浸润与转移中的作用机制，为乳腺癌的临床治疗提供理论依据。本论文利用MTT法、细胞创口愈合实验、Transwell基质胶细胞侵袭实验以及软琼脂克隆形成实验等技术手段，检测了Pam3CSK4和LTA对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移、侵袭及非锚定生长能力的影响。结果表明，Pam3CSK4和LTA的刺激能够促进MDA-MB-231细胞的增殖、浸润与迁移能力。利用实时定量PCR技术检测了乳腺癌细胞MDA-MB-231在Pam3CSK4和LTA刺激后TLR2和OPN各亚型的基因表达变化。结果显示，Pam3CSK4和LTA的刺激均能显著提高TLR2基因的表达，且二者的刺激能够显著上调OPN各亚型基因的表达。ELISA检测表明，Pam3CSK4和LTA刺激对iOPN和sOPN蛋白的表达具有明显上调作用。利用肿瘤转移PCR芯片技术对肿瘤转移相关的84个基因的表达情况进行分析。结果表明Pam3CSK4和LTA刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231后，影响肿瘤转移相关基因的表达。综上所述，本实验对OPN介导的TLR2信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231浸润与转移影响的作用机制进行了初步研究，并通过肿瘤转移PCR芯片检测了刺激后肿瘤转移相关基因的差异表达，为癌细胞浸润与转移机制的研究提供了新思路，为乳腺癌的临床检测和治疗提供了基础资料。