SBDS-GPV在雏鸭体内的动态分布和排毒规律研究

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2015年以来,福建、山东、安徽、江苏、河南和浙江等省的半番鸭和樱桃谷鸭群发生一种以软脚、短喙(喙变短,严重时舌头外露)、易骨折、严重生长障碍(僵鸭)为典型临床特征的新疫病(暂名“鸭短嘴矮小综合征”或“鸭短喙矮小综合征”),给养鸭业造成很大的经济损失。经病原分离、鉴定证实,该病由一种鹅细小病毒变异株引起,鉴于该病以短喙和生长障碍为主要临床特征,为了与经典GPV相区分,暂将这种鹅细小病毒变异株命名为短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV)。由于该病是近年来我国新出现的传染病,目前相关研究较少,研究大多集中在病原分离鉴定、病毒基因序列、PCR诊断方法等方面,对免疫学快速诊断及病毒分布和排毒等方面未见研究报道。为此,本研究对SBDS-GPV感染雏鸭后病毒在各器官组织中的分布和排毒规律进行了检测,为该病免疫学诊断和有效防控提供科学依据。1、SBDS-GPV间接免疫荧光检测方法的建立。应用抗鹅细小病毒(GPV)单克隆抗体(Mab E16)为一抗,羊抗鼠Ig-FITC为二抗,建立了检测SBDS-GPV的间接免疫荧光方法(IFA),该方法具有良好的特异性和重复性,能识别鹅细小病毒抗原,呈现亮绿色特异荧光,与 MDPV、MDRV、NDRV、DHV、ATMUV、PMV 等其他鸭病病原均无交叉反应;本研究建立的IFA方法具有快速、特异等优点,可用于鸭短嘴矮小综合征(SBDS)的快速诊断。2、IFA检测人工感染鸭体内SBDS-GPV的动态分布。2日龄半番鸭经口服和肌注二种途径分别人工感染SBDS-GPV,于攻毒后不同时间检测病毒在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、法氏囊、盲肠扁桃体、胸腺、胰腺和十二指肠等器官组织中的分布。结果显示:口服感染和肌注感染鸭的心脏、肝脏、肾脏、盲肠扁桃体、十二指肠和胰腺中均有病毒分布。其中口服感染组PI3 d在十二指肠检测到病毒抗原,5 d主要在胰腺、十二指肠、盲肠扁桃体、肝脏、心脏等,PI5 d~7d荧光强度最强,PI 10 d开始减弱,PI 14 d转为阴性。肌注感染组PI 2d肝脏、十二指肠检测到病毒抗原,PI 3 d主要在肝脏、胰腺、脾脏、十二指肠、盲肠扁桃体、肾脏,PI5 d~7 d荧光强度最强,PI10 d开始减弱,PI14 d转为阴性。提示IFA检测发病鸭的最佳器官依次为胰腺、肝脏、肾脏、十二指肠、心脏、脾脏和盲肠扁桃体等。3、应用荧光定量PCR法(qPCR)和病毒分离法(Ⅵ)测定感染鸭的排毒规律。2日龄半番鸭人工感染SBDS-GPV,采集感染后3d、5 d、7 d、10 d、12 d、14 d、21 d的口咽和泄殖腔棉拭子,应用荧光定量PCR(qPCR)和病毒分离(Ⅵ)测定雏鸭感染后的排毒情况。结果如下:(1)qPCR显示,PI 3 d 口咽和泄殖腔样品中均可检测到GPV阳性荧光信号,PI5 d阳性最强,至PI12 d 口咽和PI21 d泄殖腔检测不到阳性荧光信号,表明qPCR法检测SBDS-GPV感染雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为PI3 d~10 d和PI3 d~PI 14d。(2)Ⅵ显示,PI 5 d~10 d泄殖腔样品在MDEF中连续盲传至第三代出现细胞病变,且IFA检测为阳性,以PI 5 d样品感染细胞的荧光最强;而PI12 d后泄殖腔样品Ⅵ转为阴性。表明病毒分离结合IFA法检测SBDS-GPV感染雏鸭的泄殖腔排毒时间为PI5 d~10 d。结论:SBDS-GPV具有较广泛的组织器官侵嗜性,胰腺、肝脏、肾脏、心脏和肠道是病毒主要靶器官;SBDS-GPV可经感染鸭的口咽和泄殖腔向外界排毒,且泄殖腔排毒水平高于口咽;病死鸭或带毒鸭粪便是该病的主要传染源。
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