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牡丹天姿国色，雍容华贵，被称为“花中之王”。芍药属(Paeonia L.)牡丹组(Sect.Moutan DC.)共有8个种，分布于西藏、四川、云南、湖北、甘肃、山西、陕西、河南和安徽等省区。由于芍药属在被子植物分类和系统中的特殊位置，作为其唯一的木本类群的牡丹，其种系发生关系的研究将为芍药属的系统和进化研究提供有用的信息。中国也是栽培牡丹的发源地，有记载的中国牡丹就有两千多年历史，而在欧洲仅有五百多年。我国牡丹在长期的栽培驯化过程中，形成了以中原、西北、江南和西南等品种群为代表的，具有不同花瓣颜色、数目、花型和叶型的栽培品种近1000个，栽培遍布全国各主要城市。近年来，牡丹在日本、法国、美国、英国等国家的栽培面积也在不断扩大，牡丹正受到世界上越来越多人的喜爱。因此，研究野生牡丹种间亲缘关系，并弄清他们与栽培牡丹之间的联系，具有重要的学术和实践价值。虽然从20世纪80年代开始。我国学者历经20余年，对野生牡丹的形态和分类学、新类群的描述、孢粉学、生态与地理分布、传粉生物学、生殖特性和保护生物学进行了系统的研究，然而，对野生牡丹种间亲缘关系的研究很少。更未见有从分子水平对牡丹组(section Moutan)全部种类进行系统发育关系的研究报道。虽然国外学者的研究结果证明，利用乙醇脱氢酶(ADH)基因比使用ITS和叶绿体matK基因能建立更好的芍药属种间关系，但他们的研究只涉及牡丹组的4个种。因此，本研究在前人工作的基础上，首次使用牡丹组全部野生种的Adh基因序列全面分析了牡丹组种间亲缘关系，希望为牡丹组野生种间亲缘关系提供直接的分子证据，同时为进一步研究栽培牡丹的起源提供必要的信息。西南农业大学硕上学位论文中文摘要 本研究使用sang等(1997b)设计的引物月d/JFZ(5’一eCTCGCATATTTocTCACoAAG一3’)不11 AdhRZ(5’一GGGCACACCAACAAGI，ACTG一3’)，用PCR的方法从牡丹的总DNA中扩增Adh基因片段，并用JMI的大肠杆菌感受态细胞对pCR产物进行克隆，在含氨节青霉素和x一gal的LB平板上根据蓝白反应筛选阳性克隆。挑取阳性克隆用LB液体培养基在37℃培养12小时(过夜)。采用碱裂解法从菌液中提取质粒ON八。用ECORI酶切和PCR方法对质粒ONA进行筛选，并将选取的克隆用于测序。序列的测定在AB1377全自动测序仪上进行。用seqED3.o程序对序列进行了校正，对校正后的序列用ClustaIX程序进行对齐，对齐后的序列再加以人工检查。用得到的序列构建基因树，最后根据基因树全面分析牡丹组种间亲缘关系。 本研究共测定了牡丹组7个种的10个野生居群共10份样品的全部Adh!A、Adh1B和AdhZ基因序列，结合前人已报导的牡丹野生种的Adll基因序列，以芍药组和北美芍药组的种作外类群，用队UP*(4.0b4a)计算机程序构建了牡丹组全部8个种的Adh1A、AdhlB和AdhZ基因树(最大简约树和邻接树)，同时进行了Adh1A、AdhlB和AdhZ基因序列的合并分析。 研究结果显示，牡丹组的8个种分为两个具有90%以上白展值支持的单系分支，分别对应stern(一946)根据形态划分的革质花盘亚组(subseetJ白glnalae)不11肉质花盘亚组(subseet.Delav哪户ana。)。在革质花盘亚组内的六个种中，银屏牡丹巢湖居群与风丹聚在一起，矮牡丹、卵叶牡丹以及银屏牡丹篙县居群聚在一起，紫斑牡丹与四川牡丹聚在一起(白展值均>85%);另外，从Adh1B基因树看圆裂四川牡丹早于慎牡丹与大花黄牡丹聚在一起并得到很强的支持(MP和NJ树的自展值均为100%)。综合本文和前人的研究结果，本论文得出以卜结论:、牡丹组8个种在基因树上可根据亲缘关系远近分成两个类群，滇牡丹尸delavayi和大花黄牡丹Pludlowl’i为一群，其余的6个种为另一群。这一结果与前人根据形态将牡丹组分为革质花盘亚组(SubseetJ么ginatae)和肉质花盘亚组(Subseet.Dela处理是一致的。e)的2、在革质花盘亚组中，四川牡丹尸decomposita和紫斑牡丹尸rockii构成亲缘关系近的一 个类群;银屏牡丹ps吵urieosa subsp.万叩in脚“d汤n、凤丹p osrii、矮牡丹尸jishanensis 和卵叶牡丹尸qiui构成亲缘关系近的另一个类群。3、Adh基因支持牡丹野生种各种间的如下亲缘关系:(l)滇牡丹p delavayi和大花黄牡丹p ludl口wii亲缘关系最近:(2)四川牡丹尸decomposita和紫斑牡丹尸rockii亲缘关系最近;(3)银屏牡丹ps妙.ozicosa subsp.夕i即ingmudan平11凤丹p ostii亲缘关系最近;西南农业大学硕士学位论文中文摘要(4)矮牡丹pjishanensis和卵川‘牡丹p宁iui亲缘关系最近;(5)另外，本文结果显示银屏牡丹(高县居群)和卵叶牡丹以及四川牡丹和肉质花盘亚 组两个种间有很近的关系，值得进一步探索。