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采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术检测14种高危型人类乳头瘤病毒(HR-HPV),探讨质谱技术应用于HPV检测的临床应用价值。方法利用MALDI-TOF MS技术检测14种不同浓度的HPV质粒标准品,确定系统的特异性和灵敏度。通过质粒验证后用MALDI-TOF MS方法检测509例门诊病例中的HR-HPV感染情况;并同时对其中72例具有病理学诊断结果的临床样本用第2代杂交捕获方法(Hybrid CaptureⅡ,HC2)进行检测,比较MALDI-TOF MS和HC2方法的一致性。结果MALDI-TOF MS检测方法中14型HR-HPV质粒标准品均能被检测出来且各型的灵敏度在10-1000copies/ul之间。509例门诊样本中HR-HPV总感染率为56.58%(288/509),其中感染率在5%以上的有8种亚型,分别为HPV16(60.07%,173/288)、HPV18(30.56%,88/288)、HPV39(20.83%,60/288)、HPV45(11.81%,34/288)、HPV52(11.81%,34/288)、HPV31(11.46%,33/288)、HPV35(5.9%,17/288)、HPV58(5.56%,16/288);多重感染占49.65%(143/288),二重感染最为常见。细胞学检查中HR-HPV感染的比例随病变级别上升逐渐增加,与正常和炎性组相比具有统计学意义(P<0.05)。MALDI-TOF MS检测技术对组织学检测中高级病变检出的灵敏度为87.50%,特异性为45.49%,阳性预测值为75.34%,阴性预测值为98.19%。MALDI-TOFMS与HC2检测技术的一致度为97.22%。结论MALDI-TOF MS检测技术具有高灵敏度,高特异度的优点,适用于临床HPV分型检测,尤其适用于大规模的宫颈筛查和流行病学调查项目。