CK10、CK13、CK14、CK19在口腔扁平苔藓中的表达研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tuifei213
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目的:口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是发生在口腔粘膜的一种常见的慢性炎性疾病,同时可伴有皮肤损害。OLP病变往往局限于一个或几个部位,最常见的部位为颊粘膜后侧,其次为舌部、牙龈。OLP病损多变,以白色或灰白色网状条纹最多见(约占4l%左右),此外也可表现为红斑、角化、大疱或糜烂等其他损害形式。OLP组织学上的特点表现为上皮过度角化或过度不全角化,基底细胞液化变性以及基底膜断裂和基底膜下T细胞带状浸润。这些表现提示细胞介导的自身免疫反应对基底细胞的损伤,但OLP病损形成的初始抗原和致病的确切途径目前仍然不清楚,因此其临床治疗相当困难。角质细胞(keratinocyte)是为人们逐渐认识的一种重要免疫调节细胞,而细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)的表达与上皮角质细胞的增殖分化密切相关。CK是中间纤维(intermediate filament,IF)家族成员之一,主要在上皮细胞中表达。目前发现的CK至少有20种,人们将它们分别命名为CK1-CK20,并根据分子量和等电点分Ⅰ型和Ⅱ型。CK对维持上皮细胞的形态和连续性非常重要,而且它们具有高度的保守性及组织特异性和分化特异性,并与细胞的分化、信号转导、迁移、转化和凋亡等生命活动息息相关。CK总是以特异角蛋白对的形式表达于不同的上皮,被认为是上皮分化的不同类型和阶段的分子标志:CK5/CK14为基底层标志,CK1/CK10为终末分化标记,CK4/CK13是分层标志,CK14、CK19可为癌前病变的辅助诊断指标。由于CK在复层上皮中表达的多样性和广泛性,目前有关CK在OLP病损中的研究国内尚未见报道,国外也不多见,而且研究结论不完全一致。系统检测OLP病损口腔粘膜和健康人群正常口腔粘膜中常见CK10、CK13、CK14、CK19的异同,明确OLP病变中细胞角蛋白在表达类型和分布上的可能改变,分析其改变与OLP的发生、预后之间的可能关系,有利于OLP的治疗和预防,为进一步研究OLP的病因,更好的阐述OLP的发病机理打下基础。 方法: 1.标本的收集:按照OLP临床诊断标准和病理报告结果,在门诊收集17例颊部OLP患者的活检标本。对照组7例,取自外科手术患者手术切除的正常颊粘膜组织。 2.标本的固定:所有的标本术后立即用10%的中性福尔马林固定24小时。 3.制做石蜡块:固定好的标本冲洗、脱水、透明、浸蜡、包埋。 4.切片:每个标本5微米连续切片七张,一张用于常规HE染色,一张用PBS代替一抗做阴性对照,其他几张分别做CK10、CK13、CK14、CK19的免疫组化染色。 5.切片的免疫组化染色:采用抗CK的单克隆抗体(monoclonalantibodies,MAbs),应用SP(streptavidin-peroxidase,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)法进行CK的免疫组化染色。 6.切片的诊断:HE切片的诊断由两位有经验的病理医生盲法读片确认。免疫组化切片的诊断在参照阳性对照切片结果,在排除边缘效应、非特异染色等干扰因素的基础上,实验切片上皮细胞胞浆内出现棕黄色颗粒,判断为阳性细胞,否则为阴性。 7.结果计数标准:根据口腔粘膜上皮的特点及单抗的特异性,根据细胞染色的强度和着色细胞所占的比例进行综合评分。 8.统计分析:采用统计软件SPSS13.0进行统计分析,非参数等级资料的两样本比较用秩和检验,P<0.05为差异有统计学意义。 结果: 1.在正常非角化颊粘膜上皮中CK10通常无表达,或基底上层个别细胞表达,在正常不全角化的颊粘膜上皮中CK10通常表达于基底上层,阳性细胞趋向表层,为弱表达或中等强度的表达;在OLP的病变上皮中CK10的表达强度较正常组不同程度的增强,为中等强度表达或强表达,同时表达范围也有所增宽,有时可表达于整个基底上层,经统计分析P<0.05,证明差异有统计学意义:虽然OLP中CK10的表达随着上皮角化程度的增加表达强度有所增强,但经统计分析P>0.05,差异无明显统计学意义。 2.在正常非角化颊粘膜上皮中CK13通常表达于基底上层,主要集中于棘细胞层和颗粒层,为中等强度的表达或强表达:与前者相比在正常不全角化的颊粘膜上皮中CK13表达强度降低,一般为弱表达,表达范围也不同程度的缩小;在颊部OLP病变上皮中CK13的表达较正常组不同程度的减弱,主要表达于基底上层的棘细胞中,有时甚至无表达,与正常对照组比较P<0.05,差异有统计学意义;虽然OLP中CK13的表达与上皮的角化程度有一定的关系,角化越强表达越弱,但经统计分析P>0.05,差异无明显统计学意义。 3.在正常非角化的颊粘膜上皮中CK14通常集中表达于基底层,偶尔可以扩散至基底上浅层,一般为中等强度或强表达;与前者比较在不全角化粘膜中CK14的表达不同程度的增强;在颊部0LP的病变上皮中CK14的表达强度较正常组不同程度的增强,尤其表达范围增宽,有时甚至可以上皮全程表达,经统计分析P<0.05,证明差异有统计学意义;虽然OLP中CK14的表达与上皮的角化程度有一定的关系,角化越强表达越强,但经统计分析P>0.05,差异无明显统计学意义。 4.CK19主要表达于单层上皮,在正常颊粘膜的复层上皮的中表达阴性,同样在颊部OLP病损的复层上皮中亦未见CK19表达。 结论: 1.OLP中伴随着CK10、CK14的过度表达,出现CK13表达下调,而CK19表达阴性。 2.OLP中CK10、CK14的过度表达及CK13的表达下调分别与OLP的异常角化、增殖和分化有关,这也许是机体的一种防御反应,但同时也提示OLP存在恶性转变的可能,而其癌变潜能的大小尚有待进一步研究。 3.OLP中CK表达的改变究竟是OLP发病的原因还是结果尚有待进一步研究。
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