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目的:1.探讨MODS时期脾脏树突状细胞(DC)中泛素(Ub)的蛋白和基因表达变化及意义。2.研究可能泛素共价结合到MHC-Ⅱ上使其泛素化从而影响树突状细胞(DC)的成熟和活化,为调节免疫应答反应提供新的监控指标。
方法：通过腹腔内注射酵母多糖悬液制成MODS模型,实验分组:(1)正常对照组(n=30)；MODS组(n=180)并随机分为6小时、12小时、24小时、48小时、5-7日、12日组；H-E切片观察各时间点脾脏和心、肝、肺、肾的病理形态学改变；免疫组化检测脾脏中泛素蛋白表达；免疫荧光检测CD86、CD11c、MHC-Ⅱ的表达；通过荧光定量PCR检测小鼠脾脏内泛素基因mRNA表达的变化；流式细胞术检测脾脏DC免疫表型、外周血单个核细胞MHC-Ⅱ类分子。
结果:1.泛素蛋白在脾脏DC的表达:在伤后6小时泛素在脾脏DC中的阳性细胞表达数量增多,伤后12-24小时出现表达数量持续增高,24小时达高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。伤后48小时接近正常,5-7天表达升高,10-12天出现表达的显著下降,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR显示泛素mRNA在伤后6小时表达增强,12-24小时表达继续增强,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。48小时表达接近正常,10-12天再次出现表达下降,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。2.脾脏DC:用CD11c荧光标记DC,得到DC数量在6-24小时组明显增加,48小时开始下降,5-7日接近正常,10-12日DC数量再次明显增生；荧光标记MHC-Ⅱ、CD86得到,伤后6小时DC表面分子MHC-Ⅱ、CD86表达增高,12-24小时表达下降,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),10-12天MHC-Ⅱ和CD86表达明显降低,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。3.各脏器功能指标:伤后早期(6-12小时)各项指标变化不明显,急性期(24-48小时)组,实验鼠功能指标中ALT、BUN、CK升高,有统计学意义。外周血单核细胞对MHC-Ⅱ分子表达减少,病理改变主要为一部分脏器实质细胞变性伴间质淤血、水肿；伤后5-7日组,实验小鼠功能指标与脏器病理形态均有好转。外周血单核细胞MHC-Ⅱ分子表达增加,10-12日,各项脏器指标均显著上升,外周血单个核细胞MHC-Ⅱ分子表达下降。主要脏器实质细胞多呈变性与坏死改变。
结论:1.MODS中泛素蛋白在小鼠脾脏中的表达变化与脏器病变有密切关系,泛素蛋白在MODS两次打击机体功能障碍时呈先升高后下降趋势。2.在MODS病程中,泛素蛋白及泛素mRNA在DC表达的变化对免疫应答有关系。3.泛素可能通过泛素化DC表面的MHC-Ⅱ分子影响DC成熟和活化,从而影响MODS各时期的免疫应答,为调控免疫应答提供新的指标。