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本文采用聚乙二醇（PEG）400作为沉淀剂，双醛淀粉（DAS）作为交联剂，牛血清白蛋白（BSA）作为保护剂，制备了酵母及曲霉来源的β-半乳糖苷酶CLEAs。研究了PEG400浓度、DAS浓度及氧化度、BSA添加量、交联温度和时间等制备条件对CLEAs活性的影响；表征了CLEAs结构、最适pH、最适温度、热稳定性与动力学过程；考察了CLEAs水解乳糖与合成低聚半乳糖（GOS）过程；开发了β-半乳糖苷酶CLEAs口服制剂，研究了制备条件对口服制剂抗酸性与在模拟肠液中活性的影响。实验结果如下：（1）采用单因素法得到酵母和曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs的最优制备条件均为：PEG400浓度为75%（v/v），DAS浓度为10%（w/w），氧化度为80%，BSA添加质量比（酶/BSA）为1:8，交联温度为室温，交联时间为1h，最终CLEAs的活力保留分别高达53.84%和55.25%。（2）酵母和曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs的热稳定性都有所提高，但后者其热稳定性的提高相对较大；CLEAs与底物亲和力都有所减弱，但是曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs底物亲和能力相对较高；固定化过程对酵母β-半乳糖苷酶kcat变化不大，但曲霉β-半乳糖苷酶kcat明显减少，这与酵母和曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs结构不同有关。（3）曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs较其游离酶具有更强的乳糖水解能力，10h的水解量是游离酶的近2倍，且重复使用性较酵母β-半乳糖苷酶CLEAs好。合成GOS研究结果表明，酶浓度越高GOS合成速度越快，但产物抑制作用也越强。（4）以海藻酸为载体，并附尤特奇膜，制备酵母β-半乳糖苷酶CLEAs口服制剂，其经胃肠液降解释放后活力保留可达43.29%，并且在肠液中水解乳糖量是同等活力曲霉β-半乳糖苷酶CLEAs经胃肠液后在模拟肠液中水解量的6.3倍。