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目的:T型钙通道(T-type calcium channel,Ca_v3)根据其编码基因不同,可分为Ca_v3.1、Ca_v3.2和Ca_v3.3三种亚型,其表达和电生理特性对神经病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)的发生和发展起着重要的调节作用。脊髓背角(Spinal dorsal horn,SDH)是疼痛信号传导和局部加工的初级中枢,也是NP中枢敏化的关键部位。Ca_v3通道三种亚型在胞体和树突上的分布差异,影响了Ca_v3通道介导的钙电流对细胞电输出的贡献。虽然免疫组化研究表明Ca_v3通道亚型在成年啮齿类动物大脑和背根神经节中存在差异性分布,但这个问题尚未在SDH中阐明。因此,本研究旨在明确Ca_v3通道亚型在SDH细胞和亚细胞结构上的分布特点,以期为NP机制的研究和镇痛药物的开发提供新的理论依据。方法:选取5~8周雌雄不拘Sprague-Dawley大鼠,予低温麻醉及心脏灌流后,以腰骶膨大为中心分离出腰1-骶3段脊髓,依次剥离硬脊膜、软脊膜及所附着的神经根。取出脊髓放入4%PFA中固定,充分漂洗后置于30%蔗糖溶液,取出脊髓,切去脊髓头尾,留取L4-L6腰骶膨大部,OCT包埋剂包埋,用冰冻切片机连续横向或纵向切片(片厚30μm)。采用免疫荧光组织化学方法,用标记Ca_v3.1-3.3的一抗与SDH标记物共同孵育处理好的脊髓片,而后用对应的二抗4℃孵育过夜。在激光共聚焦显微镜下观察并分析Ca_v3.1-3.3在脊髓的大体分布特点以及在SDH细胞及亚细胞结构上的定位情况。结果:1.Ca_v3.1、Ca_v3.2和Ca_v3.3通道蛋白广泛分布于整个脊髓灰质,在SDH I-II层分布最多,其次依次是III-IV层、IX层,在V-VI层分布最少。此外,在脊髓白质Ca_v3.1-3.3也有微弱的表达;2.Ca_v3.1在SDH呈点状分布,而Ca_v3.2和Ca_v3.3在SDH主要呈神经元样分布,Ca_v3.2在SDH内侧带的分布高于SDH中侧带和外侧带。此外,三种亚型在脊髓腹角运动神经元上皆有表达;3.Ca_v3.1和Ca_v3.3在SDH树突中呈中度分布。在轴突中未观察到Ca_v3.1-3.3的分布;4.Ca_v3.1在初级传入末梢及中间神经元轴突末梢皆有分布,且主要分布在肽能初级传入末梢及抑制性中间神经元轴突末梢。Ca_v3.3在抑制性中间神经元轴突末梢也有少量分布。结论:在SDH,Ca_v3.1主要分布在轴突末梢,而Ca_v3.2和Ca_v3.3主要分布在神经元,Ca_v3.1和Ca_v3.3是分布在树突中的两个主要亚型,表明Ca_v3通道亚型在SDH存在细胞和亚细胞结构上的分布差异,提示Ca_v3通道亚型在参与SDH神经环路电活动过程中可能扮演着不同的角色。