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转基因动物在生命科学、医学和生物制药等领域有着广泛的研究和应用前景,因此科学家们一直在探索一种更简便易行、经济实用而又高效的转基因方法。为了探讨基因枪法和睾丸输出管注射法在建立转基因小鼠的可行性，我们分别进行了两个实验。实验一：基因枪轰击法在建立转基因小鼠上的实验研究。首先，挑选清洁级40日龄雄性KM小鼠20只，雌性KM小鼠60只。将需要导入的质粒eGFP-C1进行转化提取。然后准备基因枪设备，清洗发射管，清洁高压管道，准备消毒操作试剂、工具、设备。包覆DNA微弹，准备受体。最后准备金粉的清洗，DNA子弹的制作。子弹包装完成后，就开始准备基因枪轰击。我们先用基因枪轰击T293细胞,轰击后48小时观察，T293细胞出现绿色荧光，证明绿色荧光蛋白在T293细胞中表达，基因枪轰击细胞可行，可以进行下一步实验。然后开始准备基因枪轰击小鼠的睾丸，先将小鼠用腹腔注射0.1mL1%戊巴比妥钠麻醉，待小鼠麻醉后，固定四肢于木板上。将阴囊剪开一个小口，将睾丸拉出。将基因枪对准小鼠睾丸上方3-5cm处轰击。小鼠睾丸基因枪轰击后，一周以后，取小鼠睾丸培养支持细胞，以观察荧光。睾丸支持细胞培养48小时后观察出现绿色荧光，这表明eGFP-C1在小鼠睾丸的支持细胞中表达。另外取小鼠睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管石蜡切片出现了彩色荧光，进一步表明绿色荧光蛋白在小鼠睾丸曲细精管中表达。基因枪轰击小鼠睾丸10天后，挑选10只健康的小鼠和雌鼠按雌雄比例3:1合笼，待生出仔鼠后，对全部出生的小鼠提取尾尖DNA进行PCR检测，共出生小鼠314只，将这314只小鼠，全部提取尾尖组DNA织做PCR鉴定后，有12只显示阳性。阳性率为0.038﹪。通过本实验，验证了通过基因枪轰击的方法可以建立转基因小鼠。实验二：睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的实验研究。首先，质粒EGFP-C1的转化与提取同实验一。然后对T293细胞进行转染实验，48小时后观察到绿色荧光表达非常好，可以进行下一步的实验。睾丸输出管注射用玻璃针的制作好后，可以进行注射，将注射用转染液配制好，按脂质体试剂Lipofectamine2000说明书将将载体eGFP-C1与脂质体混合。麻醉小鼠，注射时浓度一般为1%的戊巴比妥钠，腹腔注射0.1mL。找出输出管将配好的转染液注射进去，注射完后立即取一只睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管全部变蓝，这表明转染液已经注射进入曲细精管。睾丸注射一周后取睾丸培养支持细胞，观察到绿色荧光，这表明eGFP-C1已经在小鼠睾丸支持细胞中表达。睾丸注射10天后挑选健康的雄鼠10只，按雌雄比例3:1合笼。生下仔鼠后提取全部小鼠的尾尖组织DNA进行PCR检测，共产下仔鼠327只，将全部仔鼠尾尖组织提取DNA做PCR鉴定后，获得阳性仔鼠17只，转基因鼠阳性率为0.052﹪。通过本实验证明通过睾丸输出管注射法可以建立转基因小鼠。