基于质谱技术的植物激素高效分析方法研究

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植物激素是重要的微量的小分子物质,调控着植物生长发育的每一个过程,因此开发高通量、高灵敏度和高选择性的分析方法对于研究植物激素的生物功能等具有十分重要的意义。本文建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱技术,同时分析检测了油菜叶片中6种植物激素。1建立了固相萃取与高效液相串联质谱联用同时测定油菜经草酸刺激后叶片中6种植物激素的定量分析方法。采用丙醇/水/浓盐酸(体积比为2: 1: 0.002)和二氯甲烷作为提取试剂,植物样品的提取液经过C18小柱纯化后,HPLC-MS/MS检测。甲醇和0.05%的甲酸水溶液作为流动相,采用梯度洗脱。串联三重四级杆离子阱质谱在MRM模式下定量分析,外标法定量;IDA模式下定性分析。该方法具有良好的线性关系及较低的检测限,其相关系数在0.9924以上,检测限范围为:0.005- 0.2ng/mL。固相萃取的回收率范围为67.03-119.83%,具有较高的回收率。相比先前的分析检测方法,该方法前处理的时间及所需要的样品的量都相应的减少,并且可以同时检测到更多种类的植物激素。2建立了基于微波辅助提取-固相萃取联用的样品前处理方法,采用HPLC-MS/MS分析检测油菜可育植株与不育植株样品叶片中的植物激素的差异。对影响萃取效果的因素:微波提取温度、微波辐射功率、提取时间进行了考察。萃取条件为:微波的提取温度70℃,功率为500w,时间为8min,同时选择C18小柱纯化样品。与传统的前处理方法比较,本方法具有简便、快速及高效等特点。在最佳的条件下,配制一系列不同浓度的样品,采用内标法建立定量分析的标准曲线,发现6种植物激素的线性范围介于0.025-200 ng/mL之间,相关系数介于0.9961-0.9994,最小检测限为0.025 ng/mL,实际样品的加标回收率均高于66.49%。该方法的具有可行性,经过测定实际样品,试验的结果与相关报道也一致。
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