论文部分内容阅读
MicroRNA(miRNA)是一组生物体基因组编码的内源性非编码小RNA(non-coding small RNA),成熟的miRNA长度19-25 nt左右。它是一类在生物体中新发现的基因表达调控因子,主要的生物功能是以降解靶mRNA和抑制靶mRNA的翻译两种作用方式在转录后水平调控基因的表达,它们广泛存在于线虫、果蝇、病毒、植物和高等哺乳动物等生物体中。研究表明,miRNA与动植物发育、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡和脂肪代谢等多种重要生命活动密切相关,表达失调将导致人类疾病;在肿瘤中,miRNA被认为可能具有肿瘤抑制基因或癌基因的作用。
检测特定状态下的组织或细胞的miRNA表达谱对深入研究miRNA的生物学功能具有重要意义。鉴于此,我们研制出了一种检测miRNA表达的微阵列芯片,并利用这个芯片检测了人脑、肝脏和心脏等组织以及HeLa、HepG2和HL60等细胞株的miRNA表达谱,聚类分析结果显示miRNA表达模式具有组织特异性,不同个体的同一组织的miRNA表达谱可以聚类在一起。实验结果显示该芯片具有良好的重复性、灵敏度和特异性。此外,我们用RT-PCR(reversetranscription-PCR)技术检测了不同组织和细胞株中miR-122、miR-9和miR-124a的表达,结果显示它们分别在肝脏或脑组织中特异高表达,与芯片结果一致。 MicroRNA 122(miR-122)是肝脏特异高表达的miRNA,近来的研究发现在肝癌组织和肝癌细胞株中表达下调,并可能成为肝癌的分子标志。然而,miR-122表达下调是在肝癌发生过程中发挥作用还是在肝癌中受到了异常的调节尚不明确。为了明确miR-122是否在肝癌发生过程中发挥作用并揭示其可能的作用机制,我们构建了miR-122稳定高表达的Hep3B肝癌细胞,并结合基因表达谱芯片技术,研究miR-122对Hep3B细胞基因表达谱的影响。结果显示miR-122影响了Hep3B细胞的基因表达谱,2倍以上变化的差异表达基因有490个,其中上调的345个,下调的145个。这些基因中有15个与肿瘤发生相关,其它基因涉及细胞周期、信号转导、细胞凋亡和细胞增殖分化等众多生物学过程。这些结果提示,miR-122可能在肝癌发生过程中发挥了作用,并可能与这些差异表达基因密切相关。此外,我们还结合生物信息学方法,在下调表达的基因中预测了miR-122在mRNA水平可能直接作用的靶基因,它们是否在肝癌发生过程中发挥了作用还需要进一步的研究。本研究初步探讨了miR-122在肝癌细胞中的生物学功能,为进一步研究miR-122在肝癌发生中的作用奠定了基础,同时也为miRNA的生物学功能及其作用机制研究提供了一个参考。