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羊痘(Capripox)是由羊痘病毒属的绵羊痘病毒(Sheeppox virus,SPV)或山羊痘病毒(Goatpox virus,GPV)引起的绵羊或山羊的一种急性、热性、接触性传染病。本实验从甘肃景泰一羊痘疑似病例病料中分离到一株羊痘病毒,利用细胞培养、动物回归试验及PCR方法对其进行鉴定,克隆表达了EEV(enveloped extracellular virus,EEV)膜蛋白并对其进行了免疫活性分析。取得了如下结果:1.羊痘病毒的分离及PCR鉴定从所采集的病变组织中所分离的毒株能够使绵羊睾丸原代细胞出现细胞病变,接种健康羊后引起体温升高和在体表少毛或无毛区出现痘疹。从组织病料及细胞培养物中提取病毒DNA,利用PCR技术,克隆羊痘病毒糖蛋白ORF118基因,序列分析表明该基因在绵羊痘病毒各流行株之间高度保守,且有一个由N端的35个氨基酸组成的信号肽和一个由N端第21到38位的疏水氨基酸残基构成的跨膜区。2.绵羊痘甘肃株膜蛋白ORF23基因的原核表达及免疫活性分析将绵羊痘甘肃株膜蛋白ORF23基因插入原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和酶切鉴定,证明成功构建了重组表达载体pET-SPV23。经IPTG诱导,该基因在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式得到大量表达,表达蛋白分子量为43kDa。利用镍金属层析柱将表达产物进行纯化,获得了理想的纯化结果。利用Western-blotting对纯化后产物进行分析,表达产物能够被绵羊痘标准阳性血清识别,具有免疫反应性。本研究成功分离鉴定了绵羊痘病毒甘肃株,克隆表达了绵羊痘病毒膜蛋白ORF23基因,证实表达产物具有免疫反应活性,为研制绵羊痘亚单位疫苗及诊断方法提供了理论依据和实验材料。