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[目 的]建立大鼠出血性脑卒中(intracerebral hemorrhage,ICH)模型和血红素(Hemin)诱导的原代神经元损伤模型,从体内体外两条途径探究新型化合物双过氧(吡啶-2-方酰胺)氧代钒酸钾[Bisperoxovandium(pyridin-2-squaramide),BpV(pis)]对出血性脑卒中引起的脑损伤的神经保护作用及其相关机制,为深入研究脑出血损伤和治疗方法提供理论依据。[方 法]动物实验使用270-280 g雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,在大脑左侧尾状核注射80μL新鲜自体血诱导脑出血模型,脑出血模型后1 h给予左侧侧脑室注射BpV(pis)(100μM,5 μL,i.c.v)。将实验大鼠随机分为三组:假手术组(Sham)、脑出血+溶剂组(ICH+DMSO)、脑出血+BpV(pis)给药组[ICH+BpV(pis)]。术后24 h提取血肿周围组织蛋白,通过Western blot检测各组蛋白激酶B(protein kinases B,AKT)、磷酸化蛋白激酶 B(phospho-protein kinases B,p-AKT)、细胞外调节蛋白激酶 1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK 1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phospho-extracellular regulated protein kinases 1/2,p-ERK 1/2)的水平;术后24 h检测血肿周围组织神经元受损情况;术后72 h检测各组大鼠脑血肿面积、大脑含水量、血脑屏障通透性;于术前1天,术后1天、3天、7天、14天通过改良神经功能评分、平衡木实验、转角实验检测动物神经系统受损程度。细胞实验采用原代培养12天的皮质神经元,用血红素(Hemin)(100 μM)处理原代神经元24 h模拟体外ICH模型,并分别用AKT抑制剂Ⅳ(2μM)、ERK 1/2抑制剂U0126(10μM)预处理0.5 h,再用BpV(pis)(200 nM)处理1h。实验共分为8组:对照组(Control)、血红素损伤组(Hemin)、血红素损伤+溶剂组(Hemin+DMSO)、血红素损伤+BpV(pis)给药组[Hemin+BpV(pis)]、血红素损伤+AKT抑制剂Ⅳ组(Hemin+AKT inhibitor Ⅳ)、血红素损伤+AKT抑制剂Ⅳ+BpV(pis)给药组[Hemin+AKT inhibitor Ⅳ+BpV(pis)]、血红素损伤+ERK 1/2 抑制剂 U0126 组(Hemin+U0126)、血红素损伤+ERK 1/2 抑制剂 U0126+BpV(pis)给药组[Hemin+U0126+BpV(pis)]。用乳酸脱氢酶释放法(lactate dehydrogenase,LDH)和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测各组神经元存活及死亡情况;提取对照组(Control)、血红素损伤组(Hemin)、血红素损伤+溶剂组(Hemin+DMSO)、血红素损伤+BpV(pis)给药组[Hemin+BpV(pis)]细胞的蛋白,用 Western blot 检测 AKT、p-AKT、ERK 1/2、p-ERK 1/2 表达情况。[结果]1.Western blot结果显示,大鼠脑出血后,p-AKT及p-ERK l/2水平下降,给予侧脑室BpV(pis)注射后,p-AKT及p-ERK 1/2水平上调,且上调程度具有BpV(pis)剂量依赖性;2.通过统计大鼠脑血肿面积发现,与ICH+DMSO组相比,[ICH+BpV(pis)]组大鼠血肿面积减小,且差异有统计学意义;3.通过检测大鼠大脑含水量发现,与ICH+DMSO组相比,[ICH+BpV(pis)]组大鼠大脑的含水量明显下降,且差异具有统计学意义;4.通过检测大鼠大脑外渗的伊文思蓝染液含量来间接反应血脑屏障通透性,发现与ICH+DMSO组相比,侧脑室注射BpV(pis)后,大鼠大脑伊文思蓝含量明显下降,且差异具有统计学意义;5.Fluoro-Jade C 染色结果显示,与 ICH+DMSO 组相比,[ICH+BpV(pis)]组血肿区周围组织神经元受损数量明显减少,且差异具有统计学意义;6.改良神经功能缺损评分、平衡木实验、转角实验结果发现,[ICH+BpV(pis)]组与ICH+DMSO组相比,大鼠出血后3、7、14天的神经行为学表现得到明显改善,BpV(pis)促进脑出血大鼠的神经功能恢复;7.Western blot 结果显示,原代神经元处理 Hemin 24h 后,p-AKT、p-ERK 1/2蛋白水平下调,用BpV(pis)处理后其表达水平上调;8.LDH实验结果显示,与Hemin+DMSO组相比,Hemin+BpV(pis)组中神经元释放的LDH减少,分别给予AKT和ERK 1/2抑制剂后,神经元LDH释放有所增加,差异具有统计学意义;9.MTT实验结果显示,与Hemin+DMSO组相比,Hemin+BpV(pis)组中损伤神经元的活性增加,分别给予AKT和ERK 1/2抑制剂后,神经元活性有所下降,且具有统计学差异。[结 论]1.BpV(pis)对出血性脑损伤具有神经保护作用;2.BpV(pis)对出血性脑损伤产生的神经保护作用可能由AKT和ERK 1/2介导。