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造血干细胞移植(hemopoietic stem cell transplantation,HSCT)用于血液系统疾病的治疗已取得迅猛发展。但由于供体有限及配型效率不高等问题,严重阻碍了其在临床上的广泛应用。因此人们迫切地寻求更为安全、经济和有效的造血干细胞的资源。诱导多能干细胞是类似于胚胎干细胞的一种多能性细胞,它可以向多向分化,将其诱导为造血干/祖细胞可为临床治疗恶性血液病提供良好的供体。于此同时,iPS的供体细胞可来自多种组织,例如皮肤成纤维、羊水细胞、外周血、尿液等等。目前,体细胞的表观遗传和组织记忆性对于iPSCs的分化潜能是否有影响仍存在着争议。本研究利用不同组织来源的iPSCs向造血分化用于验证是否存在组织记忆性。 方法: 本实验利用非整合型仙台病毒的方法建立三种不同组织来源(皮肤成纤维细胞、羊水细胞、外周血单个核细胞)的诱导多能干细胞,通过多能性免疫荧光染色、RT-PCR检测基因表达、拟胚体体外分化实验及畸胎瘤体内分化实验等验证所建iPSCs的多能性。同时利用iPSCs与基质细胞OP9共培养、利用拟胚体EB法在体外诱导其向造血方向分化。比较不同组织来源的iPSCs造血分化的差异。再通过Human Methylation450 BeadChip芯片来检测造成造血分化差异是否与组织记忆性相关。通过比对分析结果,数据分析,寻找出造成差异的特异性基因。 结果与结论: 我们建立了三种不同来源的iPSCs共3株细胞,通过RT-PCR检测到iPSCs内源性多能性基因OCT4、NANOG的表达;免疫荧光染色观察到胚胎干细胞特异性抗原TRA-1-81、SSEA-3染色阳性;畸胎瘤体内分化实验及拟胚体体外分化实验证明所建立的iPSCs可向三胚层分化。各细胞系都可以向造血方向分化,且不同组织来源的iPSCs其造血分化存在显著差异。利用甲基化芯片检测造成分化差异的特异性基因即造成组织记忆性的一系列基因,为日后建立不同疾病模型iPSC使用合适供体来源提供参考依据。